JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:04 dk. • January 30th, 2026
Dış zar vezikülleri salgılayan patojenik Gram-negatif bir bakteri olan Legionella pneumophila kültürüne başlayın.
Bu OMV'ler, bakteriyel virülansa katkıda bulunan lipopolisakkaridler ve membran proteinleri taşır.
Kültürü santrifüjle ederek sağlam bakterileri pellet haline getirin.
OMV'leri içeren süpernatantı toplayıp tekrar santrifüj ederek pellet kalıntısı bakterileri elde edin.
Süpernatantı bir membrandan filtreleyerek kalan bakterileri uzaklaştırarak OMV'leri tutun.
Bakteri kalıntılarını çıkarmak için taze bir zar kullanarak ikinci bir filtrasyon yapın.
Bakterisiz filtratı topla ve OMV'leri pellet etmek için ultrasantrifüj yap.
Süpernatantı at, pelleti tamponda tekrar askıya alın ve gevşek ilişkili proteinleri ve lipopolisakkaritleri çıkarmak için tekrar ultrasantrifüj yapın.
Süpernatantı çıkarın ve saflaştırılmış OMV'leri tampon içinde tekrar askıya alın.
OMV'lerin bir aliquotunu kan agarı ve BCYE agar plakalarına çizin ve kuluçka yapın.
Koloni oluşumunun olmaması, bakteriyel kontaminasyonun olmadığını doğrular.
OMV'leri konak-patojen etkileşim çalışmaları için düşük sıcaklıkta sakla.
Kalan sıvı kültürü 90 mililitre taze YEB ortamına ekleyin ve kültürü döner bir shaker üzerinde inkübe yap
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin