Hücre içi bakteri toplulukları içeren fare mesane epitel hücrelerinin izolyasyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:56 dk. • February 2nd, 2026
Fare mesanesinden çıkarılan mesane epitel hücreleriyle başlayın; fare mesanesinde floresan işaretli üropatonik E. coli enfekte edilmiştir.
Enfeksiyon sırasında bu bakteriler epitel hücrelerine girer ve konak bağışıklık sisteminden koruyan biyofilm benzeri yapılar olan hücre içi bakteri toplulukları (IBC) oluşturur.
Bir diseksiyon mikroskobu altında, IBC'leri bireysel epitel hücreleri içinde hapsedilen büyük floresan agregalar olarak tanımlayın.
Tek IBC içeren epitel hücrelerini izole etmek için çekilmiş cam bir kapiler kullanarak bir ağız mikropipetleme sistemi oluşturun.
Kapiller ucu kısaca PBS'ye batırarak kapiller kaynaklı sıvı alımını azaltın.
Kapilleri seçilen floresan epitel hücresine yakın konumlandırın ve nazik emme uygulayarak enfekte olmayan hücreler ve ekstrahücre bakterilerden kaçınarak tek bir IBC içeren hücre çekilin.
Hücreyi hafif pozitif basınçla steril bir mikrosantrifüj tüpüne atarak bakteriyel canlılığı koruyun.
Bu yöntem, IBC'leri barındıran epitel hücrelerinin tek hücreli analiz için izole edilmesini sağlar.
Tüm hücreler kazıdıktan sonra, çekilmemiş bir cam kapiler ucunu aspiratör tüpünün kauçuk tıkacına yerleştirin ve 1 mililitrelik pipet ucunun dar ucunu borunun diğe
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin