JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:02 dk. • February 2nd, 2026
Patojenik bakterilerle enfekte olan bir fare beyninden alınan toplam RNA alın. Ekstrakt, enfeksiyona duyarlı genlerin transkriptlerini içerir.
DNA bozucu bir enzim ekleyin ve genomik kalıntı DNA'yı bozgunlaştırmak için kuluçka yapın.
Ters transkriptaz (RT) enzimi, nukleotidler ve spesifik olmayan primerler içeren bir master karışım ekleyin.
Tamamlayıcı DNA (cDNA) sentezlemek için kuluçka yapın.
RT enzimini inaktive etmek için yüksek bir sıcaklık ekleyin.
DNA polimeraz, nükleotidler, çift zincirli DNA bağlayıcı boya ve hedef gene özgü primerler içeren bir master karışım alın.
cDNA'yı ekleyin ve DNA'yı denatüre etmek için ısı uygulayın.
Astar, hedef cDNA'ya bağlanarak yeni DNA zinciri sentezini sağlar.
Döngü, hedef genin güçlendirilmesi için tekrarlanır.
Boya, amplifikasyonlu DNA'ya bağlanır ve her döngünün sonunda kaydedilen floresans yayar.
Floresansın artması, enfekte fare beyninde enfeksiyona yanıtlı genin ifadesini doğrular.
Tüm fareleri planktonik hücreler veya biyofilm durum hücreleri kullanarak enfekte edin ve metin protokolünde tanımlandığı gibi ötenazi yapın. Sonra, beyin dokusundan toplam RNA'yı RNA çıkarma kiti kullanarak çıkarın.
Her fare için, RNA çıkarmak için tüm beyin dokusu kul
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin