JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 3:25 dk • February 2nd, 2026
Üzerine filtre kağıdı kaplı besin agarı olan bir şişe alın.
Filtre kağıdına patojenik bakteri süspansiyonu uygulayın.
Şişeye aç bir Drosophila melanogaster sineği ekleyin, ardından kapağı takın. Beslenme ve bakteri tüketimini sağlamak için kuluçka yapın.
Yutulan bakteriler bağırsağa girer ve lümenin kaplayan koruyucu zarına girer.
Bakteriler, alttaki epitelye yapışır, epitel hasarını ve istilayını teşvik eden toksinler salgılar ve iç dokuları kolonize eder.
Sineği yüzeye bağlı bakterileri çıkarmak için alkole daldırın, ardından alkolü temizlemek için durulayın.
Bir tampon ekleyin ve sineği homojenize ederek iç bakteri içeriğini serbest bırakın.
Homojenatın mikroplakada seri seyreltmeleri yapılabilir. Sonrasında seyreltmeleri besin agara tabaklayıp koloni oluşumunu sağlamak için kuluçka yapın.
Sineklerdeki ağız enfeksiyonundan kaynaklanan canlı bakteri hücre sayısını belirlemek için kolonileri sayın.
Ağız enfeksiyonundan iki ila dört saat önce, sinekleri yiyecek içermeyen standart agar şişelerine aktarın. Bu arada, her sinek için bir enfeksiyon şişesi hazırlayın.
İlk olarak, 7 mililitrelik bir numune tüpünün kapağını 500 mikrolitre standart şeker agar ile doldurun ve sertleşmesine izin verin. Sonra, agar'a bir filtre kağıdı diski yerleştirin. Sonra 100 mikrolitre bakteriyel kültürünü doğrudan filtre diskine pipetleyin. Kontrol için %5 sucrose su kullanın.
Açlık döneminden sonra, tek sinekleri hazırlanmış tüplere aktarın. Sinekler 18 ila 24 saat kuluçka geçirdikten sonra, sinekler yüzey sterilizasyonu yapılabilir. Bireyleri %70 etanol içeren 100 mikrolitre tüpte yerleştirin.
20 ila 30 saniye sonra etanolü çıkarın ve yerine 100 mikrolitre üçlü damıtılmış su verin. 20-30 saniye sonra suyu çıkarın. Sonra 100 mikrolitre PBS ekleyip sineği homojenleştirin.
Homojenatı 96 kuyuluğa sahip bir plakanın üst sırasına aktarın ve aşağıdaki her kuyuya 90 mikrolitre 1x PBS ekleyin. Sonra, 10 mikrolitre aliquot kullanarak, bu örneği seri olarak seyreltirerek CFU değerlerinin bir aralığını ayırt edersiniz. Sonra, seri seyreltmeleri bir LB besin agar plakasına 5 mikrolitre damlalarla yerleştirin.
Damlacıkları plaka üzerinde gizlice konumlandırın. Sonra tabağı gece boyunca kuluçka edin. Ertesi gün, 10 ila 60 net görünür koloni üreten seyreltmeden elde edilen CFU sayısını hesaplayın.