JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:55 dk • February 2nd, 2026
Akciğer tüberkülozuna neden olan patojenik bir bakteri olan Mycobacterium tuberculosis donmuş bir stokla başlayın.
Şişeyi eritin ve süspansiyonu hafifçe karıştırarak bakteri kümelerini dağıtın ve eşit bir konsantrasyon sağlansın.
Gerekli hacmi steril tampon içinde seyreltirerek standart aerosol aşısı hazırlanır.
Hareketi sınırlamak için bir fareyi bir ağ tutucuya sıkıştırın ve kapalı aerosol maruz kalma odasına yerleştirin.
Hazırlanan aşıyı bir şırıngaya yükleyin ve hazneye bağlı nebulizer ünitesine enjekte edin.
Sıkıştırılmış hava kullanarak süspansiyonu ince, solunabilir damlacıklara buluşturan soluma sistemini aktive edin.
Bu damlacıklar, canlı M. tuberculosis'i içerir ve odadaki havaya dağılır.
Bilinçli fare, aerosolu soluyor ve canlı bakterilerin akciğerlere derinlemesine girip enfeksiyonu başlatmasına olanak tanır.
Pulmoner tüberkülozun fare modeli artık daha fazla çalışmaya hazırdır.
Bilinen bir CFU titrine sahip Mycobacterium tuberculosis stoklarını ısıtarak başlayın. Hücreler çözüldüğünde, 27 gauge iğneyle donatılmış 1 mililitrelik bir şırınga kullanarak süspansiyonu beş kez dikkatlice karıştırarak bakteri kümelerini dağıtarak aerosol oluşumunu önleyin. İstenen enfeksiyon dozuna bağlı olarak, mikobakteriyel stokun gerekli hacmini steril PBS içeren 50 mililitrelik bir tüpe aktarın, son hacmi 6 mililitre kadar. Sonra, deneysel hayvanları ayrı ayrı file sepetlere yerleştirin. Sepetleri dairesel aerosol odasına yerleştirin ve haznenin kapağını kapatın.
Venturi-nebulizer ünitesini üç paslanmaz çelik soket eklemine takın. Mikobakteriyel süspansiyonu 10 mililitrelik bir şırıngaya aspire edin, 18 kalibre kör bir iğne ile donatılmış ve şırıngayı kapalı bir taşıma kutusunda aerosol odasına taşıyabilirsiniz. Şimdi nebulizer vida kapağını çıkarın ve aerosol oluşumunu önlemeye özen göstererek mikobakteri süspansiyonunu dikkatlice üniteye enjekte edin.
Şırıngayı %2 Buraton içeren bir keskin kaba atın ve ardından nebulizeri mühürleyin.
Solum cihazını çalıştırın.
Döngü tamamlandığında, mikobakteri süspansiyonunun tamamen nebulize olduğunu doğrulayın.