JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:40 dk. • February 2nd, 2026
Fosfatla tamponlanmış tuzlu bir salin veya PBS damlasında anestezi edilmiş yetişkin bir sivrisinek içeren bir slaytla başlayın.
Bir disseksiya mikroskobu altında, sivrisineklerin bacaklarını, kanatlarını ve başını çıkarın.
Sindirim sistemine zarar vermemek için karın ucunu kesin.
Göğüs ve karın ucunu sabitleyin, ardından sindirim sistemini nazikçe çekip çıkarın.
Çıkarılan sindirim sistemi, sindirimden sorumlu olan ve sivrisinek fizyolojisini etkileyen çeşitli bağırsak bakterilerini barındıran midgutu içerir.
Daha yüksek büyütmede, çevredeki yapıları dikkatlice çıkararak midgutu izole edin.
İzole edilen midgutu, PBS içeren yeni bir tüpte aktarın.
Bakterileri PBS'ye salmak için midgutu homojenleştirin.
Sulandırılmış homojenatı besin bir agar tabağına yayın.
Plakayı inkübe ederek sivrisinek orta bağırsağının mikrobiyal florasını temsil eden bakteri kolonilerinin büyümesini sağlar.
Sivrisini, içinde bir damla PBS bulunan steril bir cam slaytla ayrı ayrı ayrıştırın. Sivrisineklerin bacaklarını, kanatlarını ve başını penslerle dikkatlice çıkarın.
Sivrisinek göğsünü ve karın bölgesinin son bölümünü forsepsle kelepçe ile sıkıştırın ve sindirim sistemini izole etmek için ayırın.
Penseps kullanarak ürün ve malpighian tüpünü sindirim sisteminden çıkarın. Ürün midgutun ön kısmında konumlandırılır ve şekerli su tüketildikten sonra şişler. Malpighian tüpleri, midgut ve arka gutuğun birleşim noktasında yer alan ince salgılatma tüplerinden oluşan gruptur.
Diseksiye edilen midgutu, 200 mikrolitrelik steril PBS tamponu olan bir EP tüpüne yerleştirin ve steril öğütme tokvanıyla süper temiz tezgahta öğütün. Homojenatı her seyreltmeden 50 mikrolitre LB agar plakasına üç adet 10 katlık seyreltme ile seri olarak seyreldin ve ardından yayma plakası alın.
Plakayı 37 derece sıcaklıkta bir ila iki gün boyunca kuluçka yapın, ta ki tek koloni görünene kadar.