Zebrafish embriyolarında mikobakteriyel enfeksiyon sırasında makrofaj hücre ölümünün canlı görüntülemesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:29 dk. • February 2nd, 2026
Düşük eriyen agaroza yerleştirilmiş ve görüntüleme kabında floresan etiketli makrofajları ifade eden transgenik zebrafish embriyolarıyla başlayın.
Bu embriyolar, orta beyin içine intramusküler mikroenjeksiyonla floresan işaretli Mycobacterium marinum ile enfekte edilir ve lokal bir bağışıklık yanıtı başlatılır.
Katı agarozu anestezi içeren embriyo ortamı ile kaplayın; böylece anestezi ve pigmentasyonu bastırmak için kimyasal inhibitörler var, böylece görüntüleme için optik netlik sağlanır.
Kabı yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskobun çevresel odasına yerleştirin.
Parlak alan aydınlatması kullanarak enfekte bölgeyi tespit edin.
Flüoresans lazer kanallarını aktive edin, Z-stack'in başlangıç ve bitiş pozisyonlarını ayarlayın ve zaman geçişli görüntülemeyi başlatın.
Enfekte makrofajı, floresan bakterilerle dolu, yuvarlak ve hareketsiz hale gelirken görselleştirin.
Bu, sitoskelet parçalanmasını ve litik hücre ölümünün başladığını gösterir.
Zamanla makrofaj şişer ve patlar, çevredeki dokuya sitoplazmik içerikler ve içselleştirilmiş bakteriler salgılar; bu da inflamatuar litik hücre ölümünün ayırt edici özelliğidir.
Agaroz tamamen katılaştığında, agarozu yumurta suyu tabakasıyla kaplayın. Çevrese
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin