JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 3:45 dk • February 2nd, 2026
Yaşına uygun yenidoğan fare yavrularıyla başlayın.
Her yavrunun boynunun arkasındaki deriyi nazikçe kaldırın. Bir yavru yavrusu düşük konsantrasyonlu patojenik bakteri süspansiyonu, diğerine ise yüksek konsantrasyonlu süspansiyon ile deri altına enjekte edilir.
Bu bakteriler, lusiferaz enzimi ve substratını üreten biyolüminesans bir operon ifade eder ve otonom ışık yayılmasını mümkün kılar.
Koruyucu bir polisakkarit kapsülü bakteriyi çevreliyor ve yüzey antijenlerini maskeleyerek yavru köpeklerin bağışıklık hücrelerinin tanımasını engelliyor.
Yavru köpekleri doğum sonrası bakım için biyolojik annelerine geri gönderin.
Enjeksiyon bölgesinde bakteriyel çoğalması, iltihabı tetikler ve damar geçirgenliğini artırır; bu da bakterilerin kan dolaşımına girmesini ve sistemik yayılmasını sağlar.
Anestezi altındaki yavrular bir lüminesans görüntüleme sistemi altına yerleştirilin.
Lusiferaz, substratı oksitleyerek görünür ışık üretir ve yavrular içindeki bakterilerin görselleştirilmesini sağlar.
Yüksek ve düşük bakteri konsantrasyonlarıyla aşılanmış yavrularda bakteri büyüme ve yayılımı karşılaştırmak için zaman içinde görüntüler alın.
Yaşına uygun yavru köpekleri yüksek veya düşük dozlu kum gruplarına yerleştirerek başlangıç yapın; biyogüvenlik seviyesi iki dolapta. Doğum sonrası 3 veya 4. günde, aşılamadan önce tüm yavrular ağırlıklarını kaydedin.
İnsülin şırıngalarına PBS veya yüksek ya da düşük dozlu E ile yüklenin. Coli Lux inokulumunu biyogüvenlik dolabına yerleştirin ve yüklü şırıngaları buzun üzerine koyun.
Enjekte edilecek yeni doğulmuş bebeği biyogüvenlik dolabındaki temiz bir yüzeye yerleştirin ve yavruyu temizlemek için ense derisini kaldırın. İğne, deri ile kas arasındaki boşlukta derinin hemen altına eğimli bir şekilde yerleştirin. İğne derinin altında hissedilebildiğinde, 50 mikrolitre inokulant enjekte edilir ve aynı anda derinin sıkışmış kısmını serbest bırakarak geri akmayı önleyin. Sonra iğneyi yavaş ve dikkatle çıkarın.
Tüm yavrular aynı şekilde enjekte edildikten sonra, yavruları annelerine geri gönderin. Enjeksiyondan hemen sonra ve sonrasında uygun deneysel zaman noktalarında kafesi E ile yerleştirin. Coli Lux enfekte yeni doğumlu fareleri ve dam bir biyogüvenlik seviyesi iki laminar akış başlığına yerleştirip yazılımı mikro CT bilgisayarında aç. Sistemi başlattıktan ve aşama sıcaklığının 37 derece Celsius'ta kilitlenmesini, CCD sıcaklığının ise eksik 90 derece Celsius'ta kilitlenmesini bekledikten sonra, anestezi altındaki görüntüleme kutusuna yere yatan pozisyonda en fazla dört anestezi yavrusu yerleştirin.
Görüntüleme odası kapısını kapatın ve luminescent görüntüleme seçeneğini seçin. Açık filtre ve next'i seçin, uyarılma filtresini blok ve emisyon filtresini açık olarak ayarlayın. 500, 520, 560, 580, 600 ve 620 nanometre seçin.
Sonra, yavruları bentle kafese geri götürmeden önce görüntüler, anestezi iyileşmesine kadar izleme ile devam edin.