JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:12 dk. • January 30th, 2026
Genetik olarak entegre bir biyolüminesans operonu ifade etmek üzere tasarlanmış patojenik bakteri suşuyla önceden enfekte edilmiş anestezi edilmiş bir fareyi ele alalım.
Operon, lusiferaz ve substratını sentezleyen bir multienzim kompleksini kodlar.
Lusiferaz enzimi bu substratlarla reaksiyonu katalize eder ve görünür bir lülüsans üretir.
Fareyi bir görüntüleme odasının sıcaklık stabilizatlı platformuna sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve görüntüleme sırasında anestezi devam edin.
Görüntüleme sistemini kullanarak hem biyolüminesans hem de karşılık gelen farenin X-ışını görüntülerini yakalatın.
Biyolüminesans görüntü bakteriyel enfeksiyonun kapsamını gösterirken, X-ışını görüntüsü enfeksiyon lokalizasyonu için anatomik bir referans sağlar.
Görüntülemeden sonra fareyi kafesine geri döndürün ve iyileşme sağlanın.
Bakteriyel enfeksiyonun gerçek zamanlı ilerleyişini izlemek için düzenli aralıklarla biyolüminesans görüntüleri yakalayın.
Zamanla, çeşitli yerlerde biyolüminesans sinyallerin varlığı, enfeksiyonun konak genelinde yayıldığını doğrular.
Hayvanları görüntülemek için, kamera parametrelerini ayarlayarak ve sahneyi ısıtarak görüntüleme sistemini hazırlayın. Oksijen akışını dakikada 1,5 litre, izofluran ise %3,5'e ayarlayın ve fareyi anestezi odasına, ardından anestezi sonrası sıcaklık stabilize aşamasına taşıyın. Faresi kollarını açarak sırt üstü konumlandırın ve görüntüleme sırasında %2,5 izofluran uygulanacak burun koni takın.
Kapıyı kapatın ve farenin biyolüminesans görüntüleri ve röntgenlerini çekin. Görüntüleme tamamlandığında, fareyi kafesine geri götürün ve izleyin. 3-5 dakika içinde bilincini geri kazanmalıdır.