Biyolüminesans kullanarak fare modelinde idrar yolu enfeksiyonunun görselleştirilmesi

Anestezi edilmiş bir fareyle başlayın ve kateter kullanarak idrar mesanesine patojenik bakteri süspansiyonu enjekte edin.

Bu bakteriler, enfeksiyonu takip etmek için otonom ışık üretimini sağlayan biyolüminesans bir operon taşır.

Mesanenin iç astarı, lümenin alttaki dokudan ayrıldığı özel bir epiteldir.

Bakteriyel yapışma proteinleri, konak epitelyal yüzeyindeki glikoprotein reseptörlerine bağlanır ve reseptör aracılı endositozu tetikler.

İçselleştirilmiş bakteriler, yoğun hücre içi bakteri toplulukları oluşturmak için çoğalır.

Bakteriler, biyolüminesans operonu eksprese eder ve lusiferaz alt tabakasını sentezleyen bir lusiferaz enzimi ve bir enzim kompleksi üretir.

Lusiferaz, substratı oksitleerek görünür ışık yayar.

Fareyi görüntüleme odasının içine yerleştirin ve biyolüminesans sinyali yakalayın.

İlgilendiğiniz bir bölgeyi seçin ve biyolüminesans yoğunluğunu nicelikle ölçün.

Bu sinyali bakteriyel yük ve enfeksiyon ilerleyişinin gerçek zamanlı göstergesi olarak zaman içinde izleyin.

BLI edinim yazılımını açın ve görüntüleme cihazında Başlat'a tıklayın; kamera ve sahne kontrolcü sistemini test etmek ve şarj bağlantılı cihaz kamerasını eksi 90 derece Celsius'a soğutmak için tıklayın. Acquisition, AutoSave to sayfasına tıklayın. Lüminesansı seçin ve fotoğraf çekin. Uyarılma filtresini Blok ve emisyon filtresini Açık olarak ayarlayarak varsayılan parıltı ayarlarını kontrol edin.

İlk görüntüyü çekerken pozlama süresini otomatik olarak ayarlayın. In vivo ölçümler ve parlak sinyaller için pozlama süresini yaklaşık 30 saniyeye ayarlayın. Doygun görüntü nedeniyle uyarı belirdiğinde pozlama süresini kısaltın.

Orta bining, F/stop olanı seçin ve doğru FOV'u seçin. Fareleri görerken konu yüksekliğini 1 santimetre ayarlayın. Aynı anda 5 fareye kadar görüntü alın ve yansımayı önlemek için ışık baffle ile hayvanları ayırın.

Kapıyı kapatın ve görüntüleme dizisini başlatmak için Edin'e tıklayın. Sonra deneyle ilgili detaylı bilgileri doldurun. Fareleri görüntüleme odasından çıkarıp kafeslerine geri gönderin. Anestezi sonrası tam iyileşmeyi kontrol edin. Sonra kafesleri havalandırmalı raflara geri koyarak bir sonraki görüntüleme döngüsüne kadar devam eder.

Görüntüleme yazılımını başlatın ve deneysel dosyayı Bak'a tıklayarak yükleyin. Görüntünün renk ölçeğini ayarlamak için araç paletini kullanın. ROI araçlarını kullanarak görüntüye ilgi alanını çizerek tüm alanı kapsayacak kadar büyük olduğundan emin olun ve tüm görüntüler için aynı boyutları kullanın. Sonra, ışık yoğunluğunu nicelik olarak ölçmek için ROI ölçümüne tıklayın.