Sistemik Bağışıklık Yanıtlarını İncelemek İçin Farelerde Bakteriyel Lipopolisakkarit Enjeksiyonu

Uyanık bir fareyle başlayın, hareketini sınırlamak için kısıtlanmış.

Başı aşağı doğru eğip alt karın bölgesini ortaya çıkarın.

Karın orta hattını bulun ve iç organlardan kaçınmak için biraz merkezden sapmış bir enjeksiyon noktası belirleyin.

Sonra, Gram-negatif bakteriyel hücre zarfının bir bileşeni olan lipopolisakkaritler çözeltisi içeren bir şırınga alın.

İğneyi bölgeye sokarak periton boşluğuna ulaşın ve çözeltiyi enjekte edin.

Enjeksiyondan sonra LPS sistemik dolaşıma girer ve bağışıklık yanıtı tetikler.

Kan dolaşımında LPS, LPS bağlayan proteine bağlanır ve bu protein, bağışıklık hücrelerindeki membran proteini olan CD14'e aktarılır.

CD14, LPS'yi MD-2'ye iletir; bu glikoprotein Toll-benzeri reseptör 4 (TLR4) ile ilişkilenerek TLR4'ün dimerizasyonunu sağlar.

Dimerize TLR4, aşağı akış sinyal yollarını aktive eden adaptör proteinleri işe alır; bu proteinler proinflamatuar sitokin ekspresyonunu ve sistemik iltihabı indükler.

Bu yöntem, bakteriyel ürünlerin neden olduğu bağırsaklarda ve diğer organlarda mikrobiyal translokasyon ve sistemik bağışıklık aktivasyonunu modeller.

Fareyi nazikçe ama kararlı tutun ve hayvanı bir elinizle tutun. Farenin güvenli şekilde tutulduğundan ve normal nefes alabildiğinden emin olun.

Fare burnunu hafifçe yere doğru eğip karın bölgesini enjeksiyon için açığa çıkar. Karın orta hattını bulun ve sol alt veya sağ tarafa gereken LPS hacmini enjekte edin.

İğnenin periton boşluğuna girdiğinden emin olmak yanlış enjeksiyonların önlenmesi için çok önemlidir.

İğne, iç organların zarar görmesini önlemek için peritoneal boşluğa çok derin girmemelidir.

Hayvanı nazikçe ev kafesine geri götür.

Enjeksiyon anında ve ardından her 2 saatte bir 8 saat boyunca fareleri endotoksemi durumu ve şiddeti açısından izleyin. Gözlemlerinizi ekli skor tablosunda kaydedin.