JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:03 dk. • February 2nd, 2026
Kontaminasyonu önlemek ve plazmid tutumunu sağlamak için iki antibiyotikle takviye edilmiş ortamda yetiştirilen Agrobacterium tumefaciens kültürü ile başlayın.
Bakteriler, ilgi çekici bir gen taşıyan bitki ekspresyon vektörü ve antibiyotik direnç geni içerir.
Ayrıca, ilgilenilen genin bitki hücrelerine taşınması için gerekli olan virülans genlerinden oluşan bir bölgeye sahip yardımcı plazmid içerirler.
Bir parçayı, asetosyringon, bitkisel kaynaklı bir sinyal molekülü ve antibiyotiklerle desteklenen tamponlu bir ortam içeren tüpe aktarın. Sallama ile kuluçka yapın.
Asetosiringon hücreye difüzyon yapar, sinyal yolunu tetikler ve ilgilenilen genin transferi için gerekli virülans genlerinin ekspresyonunu aktive eder.
Kültürü transfer edin, bakterileri toplamak için santrifüj yapın ve süpernatantı atın.
Bir tuz tamponu ekleyin ve hücreleri tekrar tekrar yıkarak eklenen antibiyotikleri çıkarabilirsiniz.
Bakterileri asetosyringon ile tampon içine yeniden süsle ve virülans gen ekspresyonunu korumak için sarsıntı yapmadan kuluçka yapın.
Verimli dönüşüm için kültürü hemen kullanın.
Bir uç kullanarak LB plakasından pozitif bir koloni seçin ve hücreleri, 5 mililitre LB ortamı içeren bir cam tüpte aşıla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin