Mycobacterium abscessus ile enfekte olan zebrafish embriyolarında konak-patojen etkileşimlerinin canlı görüntülemesi

Floresan etiketli makrofajları ifade eden anestezi, şeffaf, transjenik zebrafish embriyolarıyla başlayın.

Embriyolar, lokalize bir enfeksiyon oluşturmak için floresan işaretli Mycobacterium abscessus rough strain ile kuyruk kasına önceden enjekte edilir.

Bu bakterilerde yüzey glikopeptidolipidlerinin olmaması, onların toplanmasını teşvik eder.

Embriyoları düşük erime noktasına sahip agarozda immobilize edin ve enfeksiyon bölgesini açığa çıkaracak şekilde yönlendirin.

Agararoz katılaştığında, anestezi sürdürmek ve dehidrasyonu önlemek için anestezi içeren balık suyu ekleyin.

Enfeksiyonu floresan mikroskopi ile gerçek zamanlı olarak izleyin.

Enfeksiyondan sonra, endozen makrofajlar bakterilere doğru göç eder ve bireysel hücreleri fagositoz yapar.

Ancak bazı bakteriler, fagositoza karşı çoğalanan, yayılan ve dirençli uzun hücre dışı agregalar oluşturarak konak hücre ölümüne ve bağışıklık sızmasına neden olur.

Buna rağmen, bağışıklık hücreleri kordonları yok edemez, bu da bakterilerin ve ölü konak hücrelerinin birikip apse oluşturmasına izin verir.

Bu, kablolu bir anahtar M olduğunu ortaya koyar. Apses bağışıklık kaçış stratejisi.

M. abscessus enfeksiyonunun canlı görüntülemesi için, trikain anestezi edilmiş embriyoları %1 düşük erime noktasına sahip agaroza 35 milimetrelik cam tabanlı Petri kabına ters mikroskop için monte etmek veya dik konfokal mikroskopi için tek bir boşluk depresyon slaytı yapmak üzere monte edilir. Embriyonu istenen konuma yönlendirin ve sertleşmiş agarozu trikain içeren balık suyuyla kaplayın. Son olarak, embriyoda ardışık floresan edinimi ve iletim görüntülemesi için 10X hedefli floresan mikroskobu veya 40X veya 63X hedefli floresan konfokal mikroskobu kullanın.