C. elegans'ta Aeromonas Patogenezi'nin Hayatta Kalma Testi Kullanılarak Modellenmesi

Besin açısından zengin bir ortamda yetiştirilen bakteriyel bir patojen olan Aeromonas sürünü kültürle başlayın.

Kültürün optik yoğunluğunu ölçer ve bakteri konsantrasyonunu tutarlı enfeksiyon yükü sağlamak için ayarlayın.

Kültürü nematod büyüme ortamı veya NGM agar üzerine kaplamak ve inkübe ederek uniform bir bakteri tabakası oluşturulur.

Gelişimsel olarak senkronize edilmiş C. elegans larvaları - zenginleştirilmiş bir ortamda tutulan bakteriyor nematodu hazırla.

Larvaları bakteriyel tabakaya aktarın ve Aeromonas'ın ağızdan alınmasına izin verecek şekilde inkubasyon yapın ve bağırsak kolonizasyonunu mümkün kılın.

Ev sahibi içinde bakteriler çoğalır ve bağırsak epitel hücrelerine zarar veren sitotoksinler salgılar, bu da ölüme yol açar.

Hayatta kalan nematodları taze bakteri plakalarına aktarın ve son solucan ölene kadar günlük olarak canlı, ölü ve tepki vermeyen solucan sayısını sayın.

Son olarak, zamanla ev sahibi yaşamlılığını değerlendirmek için bir hayatta kalma eğrisi oluşturun.

Öncelikle, dört Aeromonas suşundan her birinden tek bir koloni seçin ve metin protokolüne göre kültürleyin. Sonra, bakteri suyunun OD₆₀₀ emilimini ölçün ve emilimi 2.0'a kadar ayarlayın.

Sonrasında her suştan 30 mikrolitre bakteriyel et suyu NGM plakalarına yayılır.

Daha önce hazırlanmış L4 solucanlarını rastgele seçip Aeromonas suşlarıyla birlikte NGM plakalarına aktarın. Sonra, test tamamlanana kadar plakaları 20 derece Celsius sıcaklıkta kuluçka yapın.

Her gün tüm canlı solucanları bakterilerle yeni bir NGM plakasına aktarın. Her gün yaşayan, ölü ve sensör solucanlarının sayısını say, son solucan ölene kadar.