Name: Microtiter Bulaşık Biyofilm Oluşumu Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-30T18:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 57 s
Description: Keşfedin, mikrotiter plaka kullanarak bakteri ve mantarlarda erken biyofilm oluşumunu kristal viole boyama ile hızlıca ölçme yöntemini. Bu yöntem, mikrobiyal davranışları anlamak için hem niteliksel hem de niceliksel analiz sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Sherry Kuçma, Pete Newell ve Robert Shanks Şekil 1 görüntüleri sağlamak için teşekkür ederim. Bu çalışma GAO, Ulusal Sağlık Enstitüsü, hibe R01AI083256 tarafından desteklenen

1. Biyofilm Büyüyen <ol><li> Yabani tip Pseudomonas aeruginosa veya gece boyunca zengin bir ortamda mutant suş (yani LB) bir kültür büyütün </li><li> Biyofilm deneyleri için taze ortama aşırı gece kültür 1:100 sulandırınız. P. için standart bir biyofilm tahlil orta aeruginosa M63 minimal orta magnezyum sülfat, glukoz ve casamino asitleri (Tablo) ile desteklenmiş. Alternatif bir biyofilm teşvik etmek, daha az planktonik büyüme ve daha sağlam bir biyofilm, glikoz ve casamino asitler uyarır orta arginin tek karbon ve enerji kaynağı olarak değiştirilebilir. </li><li> 96 tabak içinde de başına seyreltme 100 mcL ekleyin. Kantitatif testleri için, her tedavi için genellikle 4-8 çoğaltmak kuyu kullanın. </li><li> Mikrotiter plate inkübe 4-24 saat 37 ° ° C. </li></ol> 2. Biyofilm Boyama <ol><li> Inkübasyondan sonra, plaka ters çevirip sallayarak dışarı sıvı hücreleri dökümü. </li><li> Su küçük bir teknenin içinde yavaşça batığın plaka (yani, küvet gibi P1000 pipetmen dipleri için pipet ucu kutuları kullanın). Suyu dışarı sallayın. Bu işlemi ikinci kez tekrarlayın. Bu adım, bir sonraki adımda lekeli olabilir unattached hücreleri ve medya bileşenleri kaldırmak yardımcı olur ve arka plan boyama önemli ölçüde düşürür. </li><li> Mikrotiter plate her bir kuyunun su kristal viyole 0.1% çözelti 125 mcL ekleyin. Çözüm yaparken eldiven ve laboratuvar önlüğü giyin. CV, toz hidroskopik ve lekeleri hazır giyim, deri, vb gibi tartım sırasında dikkatli kullanın </li><li> Mikrotiter plate 10-15 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> Yukarıda da belirtildiği gibi su dolu bir küvete daldırarak plaka 3-4 kez su ile durulayın, ayıklandığı ve tüm aşırı hücreleri ve boya plaka kurtulmak için bir yığın kağıt havlu üzerine şiddetle kurulayın. </li><li> Mikrotiter plate baş aşağı çevirin ve birkaç saat veya gece boyunca kurumaya. </li><li> Zaman kuru kalitatif testlerde, kuyular fotoğrafı olabilir. </li></ol> 3. Biyofilm miktarının <ol><li> CV çözünür mikrotiter plate her bir kuyunun su% 30 asetik asit 125 mcL ekleyin. </li><li> Mikrotiter plate 10-15 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> Yeni bir düz dipli mikrotiter çanak çözündüğünü CV 125 mcL aktarın. </li><li> Sayısal olarak bir plaka okuyucu boş olarak su% 30 asetik asit kullanılarak 550 nm'de absorbans. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/2437/2437fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 biyofilm oluşumu deneyleri için Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens ve Staphylococcus aureus için yapılan temsili bir sonuç göstermektedir. (A) P. aeruginosa (8 saat, 37 ° C) bir biyofilm ile iyi bir yan görünümü. (B) P. biyofilm ile iyi bir yan görünüm fluorescens (6 saat, 30 ° C). (C) biyofilm yukarıdan aşağıya görünüm S. kurdu düz bir alt mikrotiter plate aureus (iki kuyu, 24 saat, 37 ° C) P.. aeruginosa ve P. fluorescens hem hareketli organizmalar ve hava-sıvı arayüzü biyofilm oluşturmaktadır. S. aureus olmayan hareketli ve iyi altındaki bir biyofilm oluşturmaktadır.

<ol><li>O'Toole, G. A., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+biofilm+formation+in+Pseudomonas+fluorescens+WCS365+proceeds+via+multiple%2C+convergent+signalling+pathways%3A+a+genetic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Initiation of biofilm formation in Pseudomonas fluorescens WCS365 proceeds via multiple, convergent signalling pathways: a genetic analysis.</a> Mol. Microbiol. 28, 449-461 (1998).</li>
<li>O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aO%27Toole%2C+GA+%22Methods+in+Enzymology%22">Methods in Enzymology</a>. Doyle, R. J. , Academic Press. San Diego, CA. 91-109 (1999).</li>
<li>Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+basis+for+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+antibiotic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genetic basis for Pseudomonas aeruginosa biofilm antibiotic resistance.</a> Nature. 426, 306-310 (2003).</li>
<li>Kuchma, S. L., Connolly, J. P., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-component+regulatory+system+regulates+biofilm+maturation+and+type+III+secretion+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">A three-component regulatory system regulates biofilm maturation and type III secretion in Pseudomonas aeruginosa.</a> J Bacteriol. 187, 1441-1454 (2005).</li>
<li>Caiazza, N. C., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SadB+is+required+for+the+transition+from+reversible+to+irreversible+attachment+during+biofilm+formation+by+Pseudomonas+aeruginosa+PA14%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">SadB is required for the transition from reversible to irreversible attachment during biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa PA14.</a> J Bacteriol. 186, 4476-4485 (2004).</li>
<li>Shanks, R. M., Sargent, J. L., Martinez, R. M., Graber, M. L., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheter+lock+solutions+influence+staphylococcal+biofilm+formation+on+abiotic+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Catheter lock solutions influence staphylococcal biofilm formation on abiotic surfaces.</a> Nephrol Dial Transplant. 21, 2247-2255 (2006).</li>
<li>Caiazza, N. C., Merritt, J. H., Brothers, K. M., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inverse+regulation+of+biofilm+formation+and+swarming+motility+by+Pseudomonas+aeruginosa+PA14%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Inverse regulation of biofilm formation and swarming motility by Pseudomonas aeruginosa PA14.</a> J. Bacteriol. 189, 3603-3612 (2007).</li>
<li>Hinsa, S. M., Espinosa-Urgel, M., Ramos, J. L., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+reversible+to+irreversible+attachment+during+biofilm+formation+by+Pseudomonas+fluorescens+WCS365+requires+an+ABC+transporter+and+a+large+secreted+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Transition from reversible to irreversible attachment during biofilm formation by Pseudomonas fluorescens WCS365 requires an ABC transporter and a large secreted protein.</a> Mol Microbiol. 49, 905-918 (2003).</li>
<li>Mack, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+transposon+mutants+of+biofilm-producing+Staphylococcus+epidermidis+impaired+in+the+accumulative+phase+of+biofilm+production%3A+genetic+identification+of+a+hexosamine-containing+polysaccharide+intracellular+adhesin%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Characterization of transposon mutants of biofilm-producing Staphylococcus epidermidis impaired in the accumulative phase of biofilm production: genetic identification of a hexosamine-containing polysaccharide intracellular adhesin.</a> Infect. Immun. 62, 3244-3253 (1994).</li>
<li>Vidal, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+an+Escherichia+coli+K-12+mutant+strain+able+to+form+biofilms+on+inert+surfaces%3A+involvement+of+a+new+ompR+allele+that+increases+curli+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Isolation of an Escherichia coli K-12 mutant strain able to form biofilms on inert surfaces: involvement of a new ompR allele that increases curli expression.</a> J. Bacteriol. 180, 2442-2449 (1998).</li>
<li>Junker, L. M., Clardy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screens+for+small-molecule+inhibitors+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">High-throughput screens for small-molecule inhibitors of Pseudomonas aeruginosa biofilm development.</a> Antimicrob Agents Chemother. 51, 3582-3590 (2007).</li>
</ol>

Bu yöntem, çok çeşitli mikrobiyal türlerin kullanım için modifiye edilebilir. Non-motil mikropların genellikle kuyuların dibine bağlı hareketli mikropların genellikle, duvarlar ve / veya kuyuların dipleri bağlı. Biyofilm oluşumu (yani, büyüme ortamı, sıcaklığı, kuluçka süresi) için optimal koşulları her mikrop için ampirik olarak tespit edilmelidir. Ben her tür ya da durum (4-8) birden fazla performans için her bir plaka üzerinde bir negatif kontrol çoğaltır ve olumlu bir kontrolü de dahil olmak üzere tavsiye, ve eğer m...

<table><tbody><tr><td>1 X M63</td><td></td><td></td><td>15g KH'yi çözerek 5X M63 stok çözeltisi hazırlayın&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 35g K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; ve 10g (NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;SO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; 1 L suda. Bu stok ç...&amp;#8211;otoklavlanması gerekmez ve oda sıcaklığında saklanabilir. 5X stok çözeltiyi 1:5 oranında seyreltin, otoklavlayın, soğutun ve ardından istenen bileşenleri ekleyin.</td></tr><tr><td>KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P288-500</td><td></td></tr><tr><td>(NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;SO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5132</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63-500</td><td>1 mM nihai konsantrasyona ekleyin. Su içerisinde 1 M stok çözelti olarak hazırlayın ve otoklavlayın.</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Fisher Scientific</td><td>D16-3</td><td>Son konsantrasyon %0,2 olacak şekilde ekleyin. Saf su ile %20'lik stok çözelti olarak hazırlayın ve otoklavlayın.</td></tr><tr><td>Kazein amino asitleri</td><td>BD Biosciences</td><td>223050</td><td>Final konsantrasyon %0,5 olacak şekilde ekleyin. Suda %20'lik bir stok çözelti olarak hazırlayın ve otoklavlayın.</td></tr><tr><td>Arginin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5131</td><td>Son konsantrasyon %0,4 olacak şekilde ekleyin. Su içerisinde %20'lik bir stok çözelti olarak hazırlayın ve filtre ile sterilize edin. Bu alternatif karbon/enerji kaynağı, glikozun ve kasamino asitlerin yerine kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Mikrotitr plakaları</td><td>BD Biosciences</td><td>353911</td><td>Falcon 3911, Microtest III, Esnek analiz plakaları, 96 kuyucuklu, U-tabanlı, steril olmayan, doku kültürü işleminden geçmemiş.</td></tr><tr><td>Mikrotitrasyon plakası kapakları</td><td>BD Biosciences</td><td>353913</td><td>Kapaklar, suyla seyreltilmiş %95'lik etanol ile temizlenerek yeniden kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Kristal viyole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>229641000</td><td>Su içerisinde %0,1'lik çözelti olarak hazırlayın.</td></tr></tbody></table>

microtiter bulaşık biyofilm oluşumu testi

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Biyofilmler, tıbbi, endüstriyel ve doğal ortamlarda bulunabilir yüzeylere bağlı topluluklar, mikrop. Aslında, bir biyofilm yaşam muhtemelen çoğu ortamda mikropların büyüme baskın modu temsil eder. Olgun biyofilm birkaç farklı özellikleri var. Biyofilm mikropların genellikle toplum yapısı ve koruma sağlayan bir ekstrasellüler matriks ile çevrilidir. Bir biyofilm büyüyen Mikroplar genellikle sıvı dolu kanallar ile çevrili macrocolonies (binlerce hücre içeren) oluşan karakteristik bir mimariye sahip. Biyofilm yetiştirilen mikropların da, klinik olarak ilgili antibiyotik gibi antimikrobiyal ajanların bir dizi karşı direniş için kötü üne sahip. Mikrotiter çanak testi, biyofilm oluşumu erken aşamalarında çalışma için önemli bir araçtır ve bu testte de, mantar biyofilm oluşumunu incelemek için kullanılmış olmasına rağmen, bakteriyel biyofilm çalışma için öncelikle tatbik edilmiştir. Bu testte, statik, toplu büyüme koşulları kullanır, çünkü genellikle akış hücresi sistemleri ile ilişkili olgun biyofilm oluşumu için izin vermez. Ancak, tahlil ve ekstrasellüler polisakkarit üretimi genler gibi biyofilm oluşumu başlangıcında (yani, kamçı, pili, adhezinleri siklik-di-GMP bağlayıcı ve metabolizmasında yer alan enzimler) için gerekli birçok faktör tespit etkili olmuştur. Ayrıca, yayınlanan iş mikrotiter yemekleri yetiştirilen biyofilm, bağışıklık sistemi etkileyiciler böyle bir antibiyotik hoşgörü ve direnç olgun biyofilm bazı özelliklerini geliştirmek olduğunu gösterir. Bu basit mikrotiter çanak tahlil duvar ve / veya bir mikrotiter çanak alt bir biyofilm oluşumunu sağlar. Testin yüksek verim doğa genetik ekranlar için yararlı yanı sıra çeşitli büyüme koşulları altında birden fazla suşları tarafından test biyofilm oluşumu yapar. Bu testte Türevleri erken biyofilm oluşumu dahil olmak üzere, mikropların geniş bir yelpazede, değerlendirmek için kullanılan, ancak pseudomonads, Vibrio cholerae, Escherichia coli, stafilokoklar, enterokoklar, mikobakteriler ve mantarlar , sınırlı olmuştur. Burada açıklanan protokol, model organizma Pseudomonas aeruginosa tarafından biyofilm oluşumunu incelemek için bu testin kullanımı üzerinde durulacak. Bu testte, biyofilm oluşumu ölçüde boya kristal viyole (CV) kullanılarak ölçülür. Ancak, diğer kolorimetrik ve metabolik lekeleri sayısı ölçümü için mikrotiter plate assay kullanarak biyofilm oluşumu bildirilmiştir. Mikrotiter plate testinin kolaylığı, düşük maliyet ve esneklik biyofilm çalışma için kritik bir araç haline getirmiştir.

Tahlil, bakteri ve mantar erken biyofilm oluşumunu ölçmek için hızlı bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem mikrotiter plate mikrobiyal biyofilm oluşumu için alt tabaka olarak kullanır ve biyofilm kristal viyole suşu kullanılarak görüntülenmiştir. Tahlil ya erken biyofilm oluşumu için bir kalitatif veya kantitatif sağlar.

Microtiter Bulaşık Biyofilm Oluşumu Testi

Biyofilmler; tıbbi, endüstriyel ve doğal ortamlarda bulunabilen, yüzeylere tutunmuş mikrop topluluklarıdır. Aslında, bir biyofilm içindeki yaşam...

Bu prosedürün genel amacı, bir mikrotitrasyon plağında biyofilmler oluşturmak ve bunları incelemektir. Bu işlem, öncelikle bir 96 kuyucuklu plağa bakteriyel kültür ekleyerek gerçekleştirilir. Ardından, biyofilmi boyamak için kültür, kullanılan mikroba bağlı olarak uygun sıcaklık ve sürede inkübe edilir.Bakterilerin bulunduğu her bir kuyucuğa kristal viyole eklenir ve ardından bakteriler yıkanır. Son olarak, kuyucukların fotoğrafları çekilir ve bakteriler nicelendirilir. Nihayetinde, kristal viyole ölçümü aracılığıyla biyofilmlerin zaman içindeki birikimi ve oluşumunu gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu yöntemin temel avantajı, araştırmacıların bakteriyel ve fungal organizmalarda biyofilm oluşumunu hızla değerlendirmesine olanak tanımasıdır. Ayrıca, yüksek kapasiteli genetik taramalar için veya biyofilm oluşumunu inhibe eden yeni terapötik bileşikleri tanımlamak için de yapılandırılabilir. Yabani tip pseudomonas, aerogen veya mutant suşun beş mililitrelik gece boyu kültürü hazırlayın.LB ortamında, 10 µL kültürle, magnezyum, sülfat, glukoz ve kazein asitleri ile desteklenmiş taze M 63 minimal ortamın 1 mL'si içinde seyreltme yapın. Ardından, bir pipet kullanarak, seyreltilmiş kültürden 100 µL'yi 96 kuyucuklu yuvarlak tabanlı bir plakanın ayrı kuyucuklarına aktarın. Biyofilm büyümesine izin vermek için plakayı 37 °C'de 4 ila 24 saat boyunca inkübe edin.Biyofilmler oluştuktan sonra, plakayı inkübatörden çıkarın ve plakayı ters çevirip sıvıyı sallayarak kültüre süpernatanlarını uzaklaştırın. Ardından, arka plan boyanmasına neden olabilecek bağlanmamış hücre kalıntılarını veya ortam bileşenlerini yıkamak için plakayı küçük bir su kabına nazikçe daldırın. Suyu sallayarak boşaltın, plakayı kurulayın ve yıkama işlemini tekrarlayın.Plaka temizlendikten sonra, her kuyucuğa 125 µL %0,1 kristal viyole çözeltisi ekleyin. Hücreleri boyamak için plakayı oda sıcaklığında 10 ila 15 dakika inkübe edin.Ardından plakayı, daha önce gösterildiği gibi üç veya dört kez yıkayın. Son yıkamadan sonra fazla sıvıyı uzaklaştırmak için plakayı bir kağıt havlu yığınının üzerine güçlü bir şekilde bastırarak kurulayın, plakayı ters çevirin ve birkaç saat boyunca bu şekilde kurumaya bırakın. Plaka kuruduğunda, biyofilmlerin kalitesini değerlendirmek için kuyucuklar dijital bir kamera ile fotoğraflanabilir.Burada gösterildiği gibi, soldaki pseudomonas aerogen ve sağdaki pseudomonas fluorescence gibi hareketli bakteriler, biyofilmin büyümesi sırasında hava-sıvı ara yüzeyinde biyofilm oluşturma eğilimindedir. Buna karşılık, hareketli olmayan staphylococcus ora bakterileri, kuyucukların tabanında biyofilm oluştururlar. Biyofilmleri miktarlandırmak için öncelikle, sadece asetik asit içeren boş bir kuyucuk dahil olmak üzere her bir kuyucuğa 125 µL %30'luk asetik asit ekleyin ve biyofilmler tarafından tutulan kristal viyole'nin çözünmesi için plakayı oda sıcaklığında 10 ila 15 dakika inkübe edin.Ardından, her kuyucuktan 125 µL çözünürleştirilmiş boyayı yeni, düz tabanlı 96 kuyucuklu bir mikrotitrasyon plakasına aktarın. Bir plaka okuyucu kullanarak, her kuyucuğun absorbansını 550 nm dalga boyunda ölçün. Her kuyucuktaki kristal viyole konsantrasyonu, biyofilmlerdeki hücre sayısı ile orantılıdır.Bu grafik, 37 °C'deki inkübasyon sırasında pseudomonas fluorescence tarafından zamanla gerçekleştirilen biyofilm oluşumunun ve birikiminin miktarlandırmasını göstermektedir. Bu videoyu izledikten sonra, mikroskopi gibi diğer yöntemlerle birlikte kullanılan 96 kuyucuklu plak biyofilm analizinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu yöntem, biyofilm oluşumuna dair anlayışımıza önemli katkılarda bulunabilir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz oluşumu için basit, hızlı ve sağlam bir bir yöntem...

İzleme Oluşumu ve Antifungal Duyarlılık Testi için 96 Şey microtiter Levha tabanlı Yöntemi Candida albicans Biyofilmler

Bu videoda, bir peg plakası kullanarak biyofilmleri etkili bir şekilde ortadan kaldıran antimikrobiyal bileşiklerin taranması için bir test gösterilmektedir. Metodoloji, antimikrobiyal bileşiklerle muamele edildikten sonra biyofilmin metabolik durumunu izleyerek minimum biyofilm eradikasyon konsantrasyonunun belirlenmesini kolaylaştırır.

Antibakteriyel Ajanların Talınması için Bir Peg Plaka Biyofilm Testi

Video, biyofilm oluşumunu değerlendirmek için bir katı faz yapışma testini göstermektedir. Çok kuyucuklu bir plakada, safra tuzu takviyeli ortamdaki bakteriler katı yüzeylere yapışarak biyofilmler oluşturur, bu da kristal viyole boyama ve etanol muamelesi yoluyla kolorimetri ile doğrulanır.

Biyofilm oluşumunu değerlendirmek için bir katı faz uyum testi

Video, çok kuyulu bir plaka kullanan bir biyofilm dispersiyon testini göstermektedir. Tampon ve glikoz tedavisi biyofilmi parçalarına ayırarak bakterileri serbest bırakırken, safra tuzları strese neden olur ve bakterileri koruyucu hücre dışı polimerik maddede tutar. Tampon ve glikoz ile daha yüksek dispersiyon, koloni oluşturan birimler ölçümü ile tahmin edilen başarılı biyofilm sökme işlemini doğrular.

Bir Dispersiyon Testi ile Biyofilm Demontajının Tespiti

Çoğu bakteriyel enfeksiyon bir biyofilm üretir. Çevreleri nedeniyle, biyofilm ile ilişkili bakteriler genellikle fenotipik olarak ilaca dirençlidir. Biyofilmlerdeki bakterileri öldüren yeni antibakteriyel moleküller bu nedenle yüksek bir önceliğe sahiptir. Biyofilmleri yok etmede etkili olan antimikrobiyal bileşikleri hızlı bir şekilde taramak için bir test oluşturuyoruz.

Biyofilm İlişkili Hedefleme<em&gt; Staphylococcus aureus</emKullanma&gt; Resazurin Tabanlı İlaç-duyarlılık Deneyi

Bu çalışma, biyofilm inhibitörlerini ve bunların Bacillus subtilis çok hücrelilik üzerindeki etkilerini incelemek için tekrarlanabilir metodolojilerin geliştirilmesini sunmaktadır.

Araştırma yöntemleri<em&gt; B. subtilis</emKüçük Molekül Biyofilm İnhibitörleri Karakterizasyonu için Bir Model Olarak&gt; Biyofilmler

Biyofilm enfeksiyonları kemoterapiye karşı yüksek tolerans gösterir. Tek bir tahlil biyofilmlerin karmaşıklığını yakalayamaz. Bunun yerine, tamamlayıcı tahlillere ihtiyaç vardır. Canlılık, biyokütle ve biyofilm matrisi tahlillerini birleştiren bir tarama platformu (S. aureus için geliştirilmiş) sunuyoruz. Uzun vadeli kemoterapötik etkilerin değerlendirilmesi de dahil olmak üzere anti-biyofilm ilaç keşfine izin verir.

Doğal Bileşik Kütüphaneleri Exploration uygundur Anti-biyofilm Tahliller Bir Platform

Bu iletişim kuralı safra tuzu kaynaklı biyofilm oluşumu enterik patojenler bağlılık, hücre dışı polimer madde matris oluşumu değerlendirmek tarafından bakteriyel biyofilmler dinamik doğası yakalamak için çok yönlü bir yaklaşım kullanarak analiz okuyucu sağlar, ve dağılım.

Enterik patojenler safra tuzu kaynaklı biyofilm oluşumu: kimlik ve miktar teknikleri

Bu protokol, yüksek verimli 96 kuyulu sabitlenmiş kapak statik biyofilm taraması için kendinden montajlı derin kuyu PCR plakalı cihazları kullanarak biyofilm büyümesi ve biyokütle ölçümleri yapmak için metodoloji sunar.

PCR-Plate Deep Well Microplate Cihazları Kullanılarak Daha Büyük Bakteriyel Biyofilm Biyokütlesinin Oluşturulması

Antikorların C. tropicalis tarafından oluşturulan biyofilmler üzerindeki etkilerini incelemek için 2,3-bis (2-metoksi-4-nitro-5-sülfofenil)-5-karboksanil-2H-tetrazolyum (XTT) indirgeme testi kullanan 96 kuyucuklu mikrotitrek plaka bazlı bir protokol burada açıklanmıştır. Bu in vitro protokol, potansiyel yeni antifungal bileşiklerin biyofilmlerdeki Candida türü hücrelerinin metabolik aktivitesi üzerindeki etkisini kontrol etmek için kullanılabilir.

Antikorların Candida tropicalis Biyofilmleri Üzerindeki Etkisini Değerlendirmek için Çözünür Tetrazolyum Bazlı İndirgeme Testi

Keşfedin, mikrotiter plaka kullanarak bakteri ve mantarlarda erken biyofilm oluşumunu kristal viole boyama ile hızlıca ölçme yöntemini. Bu yöntem, mikrobiyal davranışları anlamak için hem niteliksel hem de niceliksel analiz sağlar.

Microtiter Bulaşık Biyofilm Oluşumu Testi

Daha fazla video keşfet