Çoğaltmayan Kalıcı Mycobacterium tuberculosis'te hücre tabakası geçirgenliğinin değerlendirilmesi

Mycobacterium tubercosis'in kalınlaşmış dış tabakasına sahip olan çoğaltmayan kalıcı veya NRP evresini içeren tüplerle başlayın.

Bir tüpe cam boncuklar ekleyin ve mikobakterinin dış tabakasını mekanik olarak bozarak geçirgenliği artırarak sallayın.

Sonra, boncuklarla dövülmüş mikobakteriyel süspansiyonu yeni bir tüpe aktarın.

Hem tedavi edilmemiş hem de boncukla dövülmüş hücre süspansiyonlarına floresan etiketli rifampisin (anti-tüberküloz antibiyotik) ekleyin.

Flüoresans etiketli rifampisinin mikobakteriye girmesine izin vermek için sallama ile kuluçka yapın.

Zamanla, mikobakteriye daha fazla rifampisin girer.

Örnekleri santrifüjleyerek hücreleri ayırın ve bağlanmamış rifampisin içeren süpernatantı çıkarın.

Mikobakterileri taze ortamda yeniden süzüldürün.

Numuneleri akış sitometrisi kullanarak analiz edin. Hücreler lazer ışınından geçerken, hücre içi floresans-rifampisin ile orantılı floresans yayırlar.

Farklı zaman noktalarında, tedavi edilmemiş NRP hücreleri, boncuklu hücrelere göre daha düşük floresans gösterir.

Bu, kalınlaşmış dış tabakanın rifampisin girişini kısıtladığını ve konakçı-patojen etkileşimi sırasında bakterilerin kalıcı olmasını desteklediğini gösterir.