Wnt5A aracılı Bakteriyel Klirens Artışı Sare Makrofajlarında

Bir fare makrofaj kültürünü ele alalım.

Testi, Wnt5A içeren bir tampon ile iyi ele alın, bu bir sinyal molekülü ve kontrol sadece tamponlu bir kontrol içerir.

Bakteriyel bir patojenle enfekte edin ve kuluçka yapın.

Test hücrelerinde, Wnt5A, bakterilerin fagozomlara girişini artırmak için sitoskelet yeniden organizasyonunu artıran bir sinyal zincirini aktive ederken, bu sinyalden yoksun kontrol hücreleri daha az bakteriyi içselleştirir.

İçselleştirilmeyen bakterileri temizlemek için yıkayın, ardından kalan hücredışı bakterileri yok etmek için antibiyotik içeren bir ortamla kuluçka yapın.

Wnt5A sinyalizasyonu, bakteri içeren fagozomları lizozomlarla birleşmeye hazırlar ve bu da bakteriyel bozulmaya olanak tanır.

Bazı bakteriler fagolizozomları patlayarak kaçar.

Kontrol hücrelerinde sınırlı fagozom olgunlaşması, kaçışın artmasına yol açar.

Hücreleri belirli zaman noktalarında toplayın. Ozmotik şoku indüklemek için damıtılmış su ekleyin, hücreler lizize edilir ve hücre içi bakteriler serbest bırakılır.

Lizatları agar plakalarına yayıp kuluçka yapın.

Wnt5A ile tedavi edilen hücrelerde zamana bağlı bakteriyel azalmayı değerlendirmek için kolonileri sayın.