JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:05 dk. • February 26th, 2026
Kontrol görevi gören patojenik olmayan bir bakterinin süspansiyonlarını içeren çoklu kuyu plakası ve çeşitli patojenik bakteri türlerini göreceli virülanslarını değerlendirmek için alın.
Bakteriler, aşırı büyümeyi önlemek ve enfeksiyona uygun bir ortamı taklit etmek için besin kısıtlı bir ortamda askıya alınır.
Her kuyuya L4-aşama C. elegans solucanları ekleyin ve bakteri ile solucanlar arasındaki teması artırmak için plakayı sürekli çalkalama altında kuluçka yapın.
Solucanlar, bağırsaklarına giren ve bakterileri kolonileştiren bakterilerle beslenir.
Patojenik bakteriler, bağırsak dokularına zarar veren toksinler salgılar; bu toksinler sistemsel toksisiteye ve solucanların sonunda ölümüne yol açar.
Kuluçkadan sonra, her kuyudaki canlı solucanları sayın ve hayatta kalma oranlarını değerlendirmek için bir grafik oluşturun.
Solucan hayatta kalma oranlarındaki farklılıklar, her bakteri suşunun göreli virülansını yansıtır.
Aeromonas suşları kültürlendikten ve daha önce tarif edildiği gibi emilimlerini ölçtükten sonra, bakteriyel suyu 3.500 g hassasiyette 15 dakika boyunca santrifüj edilir. Bakteriyel suyu S Medium ile ayarlayın ve S ortamında 96 delikli plakanın sekiz kuyusuna 195 mikrolitre bakteriyel çorba ekleyin. ENGM plakasından solucanları M9 ortamı ile yıkayın. Sonra, solucan çözeltisi konsantrasyonunu mikrolitre başına beş solucan olarak ayarlayın.
96 kuyu tabakasının her bir kuyusuna 5 mikrolitre solucan çözeltisi ekleyin. Plakayı bir silkeleyicide kuluçkaya geçirin ve canlı solucan sayısını 24, 48 ve 72 saat olarak sayın.