JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:11 dk • February 26th, 2026
Her biri kontrol veya test bakteri suşlarını kapsüle eden 3D baskılı alginat matrisleri içeren iki tabak alın.
Her iki suş da görsel olarak floresan bir protein ifade eder. Test suşu ayrıca curli lifleri adı verilen proteinli ekstrahücre lifleri üretmek için indüklenebilir bir gen içerir.
Desenler katı bir ortamda basılır ve kalsiyum ile yanaşı rhamnose ile desteklenir.
Kalsiyum iyonları aljinatı çapraz bağlamak için kuluçka yapın ve böylece bir hidrojel oluşturur.
Test suşunda, rhamnose, hücre yüzeyinde kendi kendine liflere dönüşen curli alt birimlerinin üretimini indükler.
Desenleri görüntülemek için floresan tarayıcı kullanın.
Kalsiyum-şelatıcı bir çözeltiyle tedavi edin ve kalsiyum iyonları sekav için çalkalama ile inkübe yapın; bu da aljinat çapraz bağlantılarını bozup hidrojeli çözer.
Çözümü bir kenara bırakın ve desenleri yeniden görebilirsiniz.
Tedavi, kontrol deseninin çözülmesine yol açarken, test deseni kıvrımlı liflerin stabilize ağı sayesinde korundu.
Baskı edilen örnekleri oda sıcaklığında üç ila altı gün kuluçka altına alın, böylece Curli lifleri gibi biyofilm bileşenlerinin üretimi sağlanır.
Sonra, plakayı floresan tarayıcıya yerleştirin ve plakaları görüntüleyin.
Aljinat matrisini çözmek için, basılan substrata pH 7 seviyesinde 0,5 mol sodyum sitrat çözeltisi 20 mililitre ekleyin, plakayı oda sıcaklığında iki saat boyunca inkübe yapın ve 30 rpm'de çalkalatın.
Sonra sıvıyı atıp plakaları tekrar görüntüleyin; böylece sitrat tedavisinden önceki ve sonrası plakaların görüntüleriyle karşılaştırın.