E. coli üzerinde Bdellovibrio bacteriovorus avlanmasının Canlı Hücre Zaman Geçişli Görüntülemesi

Bir Petri kabı ile başlayın; bu kasa, bir agaroz yastığı altında, yırtıcı bir bakteri olan Bdellovibrio bacteriovorus ve avı E. coli'nin ortak kültürünü içeriyor.

Agaroz pedleri E. coli'yi hareketsiz tutarken, B. bacteriovorus hareketli kalır ve av hücrelerini aktif olarak istila eder.

Avcı, görselleştirme için DNA polimeraz alt birimine birleşmiş kırmızı bir sitoplazmik işaret ve yeşil floresan etiket ifade eder.

Kabı bir tutucuya sabitleyin ve optimal çözünürlük için çeşitlilik için çeşitliliğin tabanına ve mikroskop objektîfine daldırma yağı uygulayın.

Tutucuyu mikroskopa monte edin ve çift kanallı floresans tespiti için yapılandırın.

Odak düzlemini bulmak ve birden fazla örtüşmeyen görüntüleme alanını seçmek için parlak alan optiklerini kullanın.

Belirli aralıklarda hem parlak alan hem de floresan görüntülerini ardışık olarak yakalamak için zaman geçişi parametreleri ayarlayın.

Bu yöntem, av tutunması ve istilayıyla başlayan avcılık, ardından av hücresi dönüşümü, filamentli büyüme, septasyon, yavru oluşumu ve av hücresi lizisine kadar olan predasyonun gözlemlenmesini sağlar.

Ortak kültürün Zaman Geçişli Floresans mikroskopisi için, kabı deney boyunca hareket etmeyecek şekilde bir Petri