Yetişkin Zebrabalıklarda Vibrio cholerae ile bağırsak kolonizasyonu ve ishal indüksiyonu

Yetişkin zebra balığını steril enfeksiyon sularına yerleştirin ve istenen yoğunlukta patojenik bir Vibrio cholerae suşu ekleyin.

Balığın dışarı atlayıp kuluçka yapmasını önlemek için bedekleri delikli bir kapakla kapatın.

Zebrabalıklar bakterileri yukar; bakteriler bağırsağa ulaşır, flagellalarını kullanarak mukus tabakasından geçer ve epitellere yapışır.

Epitelde kolonileştirir ve bağırsak bütünlüğünü bozan toksinler salgılar; bu da iyon, sıvı ve protein sızıntısına yol açar.

Toksinler ayrıca epitelyal mukus salgılanmasını tetikleyerek bakteriyel kalıcılığı teşvik eder.

Sıvı, mukus ve bağırsak içeriğinin birikimi, artan su bulanıklığıyla tespit edilebilir sulu ishal oluşur.

İnkubasyon sonrası balıkları toplayın ve enfekte suyu dezenfektan haline getirin.

Balıkları steril suya aktararak yüzeydeki bakterileri uzaklaştırın.

Balığı toplayıp tekrar steril suya transfer ederek daha fazla analiz yapın.

V. cholerae kültürleri hazırlandıktan sonra, zebrabalıkları daldırarak aşılayın. İlk olarak, dört veya beş zebra balığını, içinde 200 mililitre steril enfeksiyon suyu bulunan 400 mililitrelik bir beşek koyun. Sonra istenen enfeksiyon konsantrasyonu için 1 mililitre V.cholerae kültürü ekleyin.

Sonra, beakerin üstünü delikli bir kapakla kapatın. Tüm bedekleri hazırladıktan sonra, onları 28 derece Celsius sıcaklığına ayarlanmış cam ön kuluçka makinesine aktarın. Geçici bir maruz kalma için, yaklaşık altı saat sonra, balıkları toplamak için bir balık ağından beaker suyunu boşaltın. Enfekte su, bakterileri öldürmek için çamaşır suyu ile bertaraf edilmelidir.

Sonra, balığı beş dakika boyunca 200 mililitre steril enfeksiyon suyuna koyun. Beş dakika sonra, bu suyu bir ağ üzerinden geçirin ve suyu çamaşır suyu ile atabilirsiniz. Şimdi balıklar 200 mililitre steril enfeksiyon suyla yeni temiz bir beğene konabiliyor.