JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:51 dk. • March 31st, 2026
Farelerde idrar yolu enfeksiyonlarıyla ilişkili anaerobik bir bakteri olan G. vaginalis'in antibiyotiklere dirençli bir sürünü inceleyin.
İlk mesane enfeksiyonu sırasında, üropatotik E. coli mesane epitel hücrelerinde sakin rezervuarlar oluşturur.
G . vaginalis'e sonraki maruziyet, toksin aracılı yüzeysel hücrelerin dökülmesini tetikler; bu da uykuda olan UPEC'in yeniden ortaya çıkmasına ve tekrarlayan İYE'lere yol açmasına olanak tanır.
G. vaginalis inokulumunu hazırlamak için, stok suyu antibiyotiksiz bir besin agar tabağına çizerek bakteriyel iyileşmeyi mümkün kılın.
Aktif olarak büyüyen koloniler elde etmek için anaerobik olarak kuluçka yapın.
Yoğun kolonileri antibiyotiksiz besin çorbasına aktarın.
İstenen bakteri konsantrasyonuna ulaşılana kadar anaerobik koşullarda statik olarak kuluçka yapın.
Konsantrasyonu tahmin etmek için optik yoğunluğu ölçün.
Süspansiyonu bir tüpe aktarın, bakterileri pelletlemek için santrifüj yapın, süpernatantı atın ve bir tamponda yeniden süzülün.
Seri seyreltmeler hazırlayın ve G . vaginalis'in seçici büyümesini sağlamak ve kontaminasyonu önlemek için antibiyotik içeren ortama kaplamak sağlanır. Aşı konsantrasyonunu belirlemek için kolonileri sayın.
G'yi döngüye sokarak başlayın. vaginalis, -80 derece derecelik dondurucu stoktan anaerobik bir odaya süzülür. Bakteriyi antibiyotiksiz bir NYCIII plakasına çizin. Plakayı 37 derece Celsius'ta anaerobik olarak 24 saat kuluçka yapın.
Anaerobik odada, beş mililitre anaerobik NYCIII ortamını, NYCIII plakasından hücrelerle dolu bir mikrolitrelik döngüyle aşılayın ve kültürü anaerobik koşullarda 37 Celsius'ta 18 saat boyunca statik olarak inkübe edin. Büyüme ortamına antibiyotik eklemeyin. KültürünOD 600'ünü spektrofotometre kullanarak belirleyin.
Sonra, bir dakika boyunca 9.600 kez g ile santrifüj yapın ve medyayı aspire edin. PBS'deki bakteriyel pelleti istenen konsantrasyona geri alın ve inokulumu seri olarak seyreltip kaplamaya alın.