JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:04 dk. • February 26th, 2026
Kollajen kaplı bir kuyu girişi içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Kuyuya bir genleşme ortamı ekleyin.
Ortamdaki besinler hücre çoğalmasını desteklerken, farklılaşma inhibitörleri kök benzeri bir durum korur.
Kolon kök hücre kültürlerinden elde edilen epitel hücre kümelerinin askısını kuyuya yerleştirip kuluçkaya ekleyin.
Hücreler kollajen kaplı yüzeye yapışır ve hem üst hem de alt bölmelerden besin alır.
İnhibitörler hücre farklılaşmasını engeller ve hücre kümelerinin çoğalmasını kolaylaştırır.
Faz kontrast mikroskobu kullanarak kültürü gözlemleyin.
Tek tabaka oluştuktan sonra, kültür ortamını hücre farklılaşma inhibitörlerinden arındırılmış taze ortamla değiştirin.
Bu, hücrelerin sıkı birleşimlere sahip olgun kolon epitel hücrelerine farklılaşmasını kolaylaştırır.
Bu hücreler mukus salgılar ve konak-patojen-patojen-etkileşim çalışmaları için fizyolojik bağırsak bariyerini taklit eden fonksiyonel bir monotabaka geliştirir.
Her insertin altındaki boşluğa 600 mikrolitre genleşme ortamı pipetleyin. Her inserte şişeden 100 mikrolitre hücre süspansiyonu pipetleyin.
Plakayı doku kültürü kuluçka makinesine geri gönderin ve en az 12 saat boyunca rahatsız edilmeden bırakın. Plakayı sallamaktan veya keskin şekilde eğilmekten kaçının. İnkübatasyondan sonra, plakayı 2,5 ila 10 kat objektif lens ile faz kontrastlı ışık mikroskobuna yerleştirin.
İnhibisyon tedavisini durdurmak için inhibitörsüz kültür ortamı ile yenileyin. Ortamı her iki-üç günde bir yenilemeye devam edin, birleşene kadar.