JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:02 dk. • February 26th, 2026
Hücre bölünmesini engelleyen bir antibiyotik içeren ortamı ele alalım.
Onu çubuk şeklinde, Gram-negatif bakterilerle aşılayın.
Sallama ile kuluçka yapın.
Antibiyotikin varlığında bakteriler bölünmeden büyümeye devam eder ve uzun filamentler oluşturur.
Kültürü toplayıp düşük sıcaklıkta santrifüj edin. Süpernatantı atın ve lifleri lizisi önlemek için bir sakroz çözeltisiyle yıkayın.
Sakaroz çözeltisini atın.
Bir tampon ekleyin, ardından enzimler ve EDTA ekleyin. EDTA, dış zarı zayıflatarak lizozimin girmesine ve peptidoglikan tabakasına parçalanmasına izin verir.
Bu, hücre duvarını kaldırır ve bakteri hücresinin küçülmesine izin verir. DNase I, hücrelerden salınan kromozomal DNA'yı koparır ve hücre tokelemesini önler.
Hücrenin suyu çekmesini sağlamak için hafif bir girdabla hipotonik bir çözelti ekleyin.
Esnek zarlar, hücrenin sferoplast adı verilen küresel bir şekil almasını sağlar.
Sferoplastları içeren bir aliquot'u iki tüpte soğuttulan izotonik çözelti ile aktararak sferoplastları stabilize edin.
Gram-negatif E.coli sferoplastları hazırlamak için, gece kültürünü 25 mililitrelik bir şişede 25 mililitre TSB ile 1'e 100 oranında seyreltin ve bakteriyi tekrar 2,5 saat boyunca sarsıntı kuluçka m
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin