JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:42 dk. • February 26th, 2026
Grup B Streptococcus veya GBS kültürünü, fırsatçı bakteriyel bir patojen olarak alın.
Kültürü taze ortamda seyreldin ve aktif olarak bölünen bakteriler elde etmek için kuluçka yapın.
Kültürü konik bir tüpe aktarın.
Santrifüj yaparak bakterileri pellet et, sonra süpernatantı at.
Bakterileri tampon ile yıkayın.
Tekrar santrifüj yapın, süpernatantı çıkarın ve bakteriyi tampon içinde yeniden süzültün.
Sonra, enfeksiyona daha yatkın olan, astarlı vajinal epitelli hormonlu dişi bir fare kullanın.
Fareyi tutun. İnce bir pipet ucu kullanarak GBS süspansiyonunu vajinal lümene dağıtın.
Fareyi bırakın, kuyruğunu kaldırın ve ön patilerin sağlam bir yüzeyde yürümesine izin verin.
Bu, vajinal lümende inokulum tutulmasını teşvik eder ve GBS tutumunu mümkün kılar.
Vajinal açıklığı inokulum geri akışı için kontrol edin.
Yapışan bakteriler vajinal epitel yüzeyini kolonileştirir ve enfeksiyon oluşturur.
Vajinal enfeksiyonlu fare modeli daha fazla çalışmaya hazırdır.
Enjeksiyon günü, Todd Hewitt çorbasında (THB) ilgi gören GBS suşunun beş mililitrelik sıvı kültürünü 37 derece Celsius'ta yetiştirin.
Ertesi sabah, GBS'yi 1 ila 10 hacimde taze THB'de altkültürlenerek 37 derece Celsius'ta iki ila üç saatlik kuluçka için, bakteriler orta günlük faza ulaşana kadar. Sonra, alt kültürü steril, 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın ve bakteri hücrelerini santrifüj edin. Pelleti 200 mikrolitre steril PBS ile yeniden askıya alın.
Sonra, süspansiyonun toplam hacmini 10 farede 1 mililitre PBS'ye çıkararak yeni, 5 mililitrelik kültür tüpünde 0,4 OD600'e ulaşın. Kültürü yeni, 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve bakterileri tekrar pellet edin. Sonra, PBS'deki hücreleri orijinal hacmin onda birinde yeniden süzülür.
Bakteriden 50 mikrolitre, THB agar üzerinde seri seyreltme ve kaplama için ayırın, böylece inokulumun tam CFU'su belirlenir. Sonra, 200 mikrolitrelik jel yüklemeli pipet ucuna 10 mikrolitre GBS çekin ve ilk hayvanın boynunun pırtındaki gevşek deriyi başparmak ile işaret parmak arasına elle sabitleyin, ardından kuyruğu hareketsizleştirin. Pipet ucunu vajinal lümenin içine 5 ila 10 milimetre soluk ve tüm inokulum hacmini dağıtın.
Sonra, hemen sapı bırakın ve kuyruğu kaldırarak hayvanın arka ucunu kaldırın, ön patileri sert bir yüzeyde yürütün. Bir dakika sonra, vajinal açıklığı herhangi bir aşı geri akışı olup olmadığını görsel olarak inceleyin.