Fare vajinal lümeninde grup B streptococcus yükünün sürüntü ve kromojenik kültürle nicelendirilmesi

Grup B Streptococcus veya GBS ile vajinal olarak kolonize edilmiş dişi fareyi alın, bu vajinal yolun fırsatçı bakteriyel patojenidir.

Fareyi sabitleyin ve vajinal lümene tampon nemli bir sürüntü yerleştirin.

Sürüntü nazikçe döndürerek vajinal duvara hafif bir baskı uygulayarak yüzeye bağlı bakterileri dışarı çıkarın.

Sürüntü bir tampona daldırın ve bakteriyi askıya almak için karıştırın.

Süspansiyonu tampondaki seri seyreltir ve kromojenle bağlantılı bir alt alt tabaka içeren kromojenik diferansiyel agar üzerine kaplama yapar.

Bakteriyel büyüme için kuluçka yapın.

İnkubasyon sırasında, GBS kromojenik substratı hidrolize eden spesifik bir enzim ifade eder.

Serbest bırakılan kromojen, kendiliğinden oksidlenme ve dimerizasyon geçirerek pembe veya mor renkli bir bileşik oluşturur.

Bu, diğer bakteri kolonilerden görsel olarak farklı olan pembe veya mor renkli GBS kolonilerine yol açar.

GBS yükünü niceliklendirmek ve fare modelinde kalıcılığını değerlendirmek için kolonileri sayın.

Sürüntü almadan hemen önce, pamukları PBS'de önceden ıslatın ve az önce gösterildiği gibi farelerden birini tutun.

Sürüntü vajinal lümene 10 milimetre yerleştirin ve vajinal duvara hafif bir baskı uygulayarak nazikçe dört kez saat yönünde ve dört kez saat yönünün tersine döndürün.

Çubuğu, içinde 100 mikrolitre PBS bulunan 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin ve pamuk liflerinden bakterilerin serbest bırakılması için tüpü ve çubuğu yaklaşık 15 saniye vortex ile alın. Daha sonra her örneği PBS'de seri olarak seyreltirin ve üreticinin talimatlarına göre hazırlanmış diferansiyel medium agar plakasında 1-10 ila 10.000 arası 20 mikrolitre levha ile 37 derece Celsius'ta 24 saat kuluçka için hazırlanır. GBS kolonileri ya parlak pembe ya da mor renginde görünecektir.