Patojenik Bakterilerde Enzim Kaynaklı Biyofilm Bastırmanın Nicelendirilmesi

Her biri biyofilm oluşturan, patojenik bir bakteriyle aşılanmış kontrol ve tedavi kuyuları içeren bir mikroplaka alın.

Tedavi kuyuları, biyofilm oluşumunu bozan bir enzim içerir.

Düşük oksijenli bir ortam oluşturmak için mikro-anaerobik koşullarda kuluçka yapın. Bu, yüzey yapışmasını sağlayan bakteriyel sinyal moleküllerinin salgılanmasını teşvik eder. Tedavi kuyularında enzim bu molekülleri bozur ve böylece bakteriyel bağlanmayı azaltır.

Kuyular yıkayıp yapışmayan hücreleri çıkarır.

Taze ortam ekleyin ve kuluçka yapın. Yapışan bakteriler çoğalır ve biyofilm matrisini oluşturan hücre dışı polimerik maddeler salgılar.

Ortamı çıkarın ve kuyuları yıkayın.

Katyonik bir boya ekleyin ve negatif yüklü biyofilm bileşenlerine bağlanmasını sağlamak için kuluçka yapın.

Bağlanmamış boya çıkarmak için yıkayım.

Bir çözücü ile karıştırarak bağlanmış boya çözeltiye bırakılır.

Biyofilm biyokütlesini niceliklendirmek için optik yoğunluğu veya OD'yi ölçün.

Tedavi kuyularındaki düşük OD, ilk hücre yapışmasının bozulmasından kaynaklanan biyofilm oluşumunun azalmasını yansıtır.

Başlamak için, LB'de 30 derece Celsius'ta 16 saat boyunca sallanan kuluçka içinde 5 mililitrelik A.baumannii S1 kültürü yetiştirin.

Kültürü