Biyofilm oluşumunun enzim aracılı inhibisyonunun mikroskobik değerlendirmesi

Biyofilm oluşturan bir bakterinin süspansiyonlarını içeren iki cam tabanlı mikro tabak ile başlayın.

Tedavi kabı aktif sinyal bozucu bir enzim içerirken, kontrol inaktive edilmiş enzimi içerir.

Tabakları kapatın ve mikrotabak yüzeyine bakteriyel yapışmasını sağlamak için kuluçka yapın.

Yapışmayan hücreleri temizlemek için yıkayım, ardından enzimleri içeren taze ortam sokup kuluçka yapın.

Kontrol kabında, bakteriler sinyal molekülleri aracılığıyla iletişim kurar ve ekstrahücre polimerik maddeler (EPS) üreterek bir biyofilm oluşturur.

Aktif enzim, sinyal moleküllerini bozar, işlevlerini bozar ve biyofilm oluşumunu azaltır.

Taze ortamla yenileyin ve enzimin biyofilm bozucu etkilerini güçlendirmek için daha fazla kuluçka yapın.

Ortamı çıkarın, floresan etiketli lektinler ekleyin ve lektinin EPS'ye bağlanmasını sağlamak için kuluçka yapın.

Bağlanmamış lektin çıkarmak için yıkayın.

Biyofilm mimarisini korumak için bir fiksantif ile kuluçka yapın, sonra kabı durulayın.

Biyofilm oluşumunun enzim aracılı baskılanmasını değerlendirmek için konfokal mikroskopik görüntüler alın.

A. baumannii S1 biyofilmlerinin konfokal lazer tarama mikroskopisini (CLSM) yapmak için, LB içinde 30 derece sıcaklıkta 16 saat