Polimeraz zincir reaksiyonu kullanılarak ikili kültürde sakkaribakterilerin tespiti

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 2:06 dk • February 26th, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Saccharibacteria enfekte Actinomyces kültürü ile başlayın.

Ultra küçük parazitik bakteri olan Sakkaribakteri ve konakçısı ikili bir kültür oluşturur.

Enfekte kültürün, elektroforez takip boyası ve Saccharibacteria'ya özgü primerlerle amplifikasyon reaktifleri içeren PCR tüpüne bir aliquot ekleyin.

Tüpü belirli PCR koşullarıyla bir termosiklere yerleştirin.

İlk denatürasyon sırasında, ısı Saccharibacteria'ı lizeder ve genomik DNA salgılar. Aktinomyces, sert hücre duvarları sayesinde sağlam kalır, bu da konak DNA salınımını sınırlar.

Isı daha sonra Saccharibacteria DNA zincirlerini denatüre eder ve Taq polimerazı aktive eder.

Tavlama sırasında, primerler Saccharibacteria genomundaki tamamlayıcı dizilere bağlanır.

Bunun üzerine, Taq polimeraz primerlere dNTP ekler ve yeni DNA zincirleri sentezler.

Amplifikasyonlu PCR ürünü, DNA parçalarına bağlanan bir boya ile önceden boyanmış bir agaroz jeline yükleyin.

Elektroforez yapın ve jeli UV ışığı altında görselleştirin.

Saccharibacteria-spesifik amplikon bandı, ikili kültürde konak-parazit etkileşimini doğrular.

Aliquot 24 mikrolitre PCR master karışımını 0.2 mililitrelik PCR tüpüne karıştırın. Bir mikrolitre sakkaribakteri enfekte kültürü ile infekteye alın ve tüpü bir termosiklere yerleştirin.

PCR programını metin el yazmasında tarif edildiği gibi ayarlayın. PCR ürünlerini %1 Agros jel ile yükleyip çalıştırın. Yaklaşık 600 bazdan oluşan bir bant, sakkaribakterilerin varlığını doğrular.

08:58

Su Kaynaklı Antibiyotiğe Dirençli Bakterilerin İzolasyonu ve Tanımlanması ve Antibiyotik Direnç Genlerinin Moleküler Karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:34

Campylobacter spp.'nin Çiğ Etten Tespiti ve İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:23

Helicobacter pylori ve Antibiyotik Direncinin Saptanmasında Gastrik Mukoza Kantitatif Polimeraz Zincir Reaksiyonu Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:17

Mikroarray Analizi için Saccharomyces cerevisiae

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:30

Kan örneklerinden Bakteriyel Patojen Algılama ve Antimikrobiyal Direnç Testi için bir günlük iş akışı şeması

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:20

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:02

Bakteriyel Biyosensör Kullanarak Hedef Analitin Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:05

Konakçı Bakterilerle İkili Sakkaribakteri Kültürünün Oluşturulması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:32

Ağız Boşluğundan Simbiyotik Sakkarakterinin Kararlı İkili Kültürlerinin Kurulması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:55

Saccharomyces cerevisiae'de Proximity Ligation ve Kantitatif PCR ile Homolog Rekombinasyon Ara Ürünlerinin Saptanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026