Zebrafish modeli kullanarak mikobakteriyel enfeksiyonda konak bağışıklığının rolünün değerlendirilmesi

Anestezi altında yabani tip zebrabalıklar ve lenfositleri olmayan bağışıklık sistemi zayıf zebrabalıkları alın.

Her balığı ventral tarafı yukarı doğru, nemli bir süngerle oyulmuş bir yarığa yerleştirin, böylece canlılığı koruyun.

Karın boşluğuna Mycobacterium marinum enjekte ederek insan tüberkülozunu modelleyen sistemik bir enfeksiyon oluşturulur.

Enjeksiyondan sonra balıkları taze akvaryum suyuna aktarın ve iyileşme için izleyin.

Vahşi tip balıklarda, enflamatuar bir yanıt bakteriler, enfekte makrofajlar ve lenfositlerden oluşan bir granüloma oluşturur. Granüloma bakterileri içerir ve yayılmasını engeller.

Lenfositler, makrofajların antimikrobiyal işlevini güçlendiren sitokinler salgılar ve bakteriyel öldürmeyi mümkün kılar.

Bağışıklık sistemi zayıf balıklarda granuloma lenfositlerden yoksundur. Sonuç olarak, makrofajlar kısmen aktif kalır, bakterilerin hayatta kalmasına, çoğalamasına ve yayılmasına olanak tanır ve bu da balık ölümlerine yol açar.

Bir hayatta kalma grafiği oluşturun. Bağışıklık sistemi zayıf balıklarda yüksek ölüm oranı, enfeksiyonu kontrol etmede lenfositlerin rolünü vurgulamaktadır.

İlk olarak, seyreltilmiş bakteriyel çözeltiyi parafin filmine 5 mikrolitrelik bir damla pipetleyin. Sonra, damlayı 30 gauge insülin iğnesine çekin.

Bu deney için beş ila sekiz aylık bir balık kullanın; biri vahşi tipli balık, diğeri ise bez mutant balık. Bu balıkları nemli köpüklü plastik parçasının yarıklarına ventral tarafı yukarı doğru konumlandırın. İnsülin iğnesini pelvik yüzgeçler arasına 45 derece açıyla enjekte edin.

İğneyi yukarı doğru tutarak tüm açıklığın karın boşluğunun içinde olduğundan emin olun. Sonra, bakteriyel çözeltiyi yavaşça enjekte edin. Bunun ardından, iğneyi dikkatlice çıkarın ve balığı hemen taze tank suyu ile dolu bir kurtarma tankına nakledin.

Kullanılan bakteri aliquot'tan her 15 dakikada bir 7 saat 10 tabaklarında örnekler alın. Bu örnekleri enfeksiyon dozunu doğrulamak için beş gün boyunca 29 derece Celsius'ta kuluçka yapın. Balıkların sağlığını düzenli olarak kontrol edin; enfeksiyon belirtisi olan balıkları %0,02'den fazla 3-aminobenzoik asit etil ester içeren suda kuluçka olarak ötanize ettiğinizden emin olun.