JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:36 dk. • February 26th, 2026
Listeria monocytogenes içeren filtre kağıdı içeren bir tüp alın.Bu bakteriler, enfekte fare makrofajlarından toplanır.
RNA bozulmasını önlemek için RNaz inhibitörleri içeren bir tampon ekleyin, ardından bakterileri yerinden çıkarmak için tüpü birden fazla açıdan girdabla vurulur.
Santrifüj yapın ve süspansiyonu fenol–kloroform–deterjan karışımı içeren bir tüpe aktarın.
Girdap ve yüksek sıcaklıkta kuluçka yapın, bakteri zarlarını bozmak, proteinleri etkisiz hale getirmek ve bakterileri lizize ederek hücre içi bileşenler serbest bırakmaktır.
RNA açısından zengin sulu fazı diğer bileşenlerden ayırmak için santrifüj.
RNA'yı toplayıp sodyum asetat ve etanol içeren bir tüpe aktarın.
Vortex, sonra düşük sıcaklıkta kuluçka yapın.
Sodyum asetat, RNA'nın negatif yükünü nötralize ederken, etanol ve soğuk koşullar RNA çökelmesini teşvik eder.
RNA'yı pelletlemek için santrifüj.
Üst yüzeyi çıkarın ve pelleti soğuk etanol ile yıkayın.
Tekrar santrifüj yapın, üst yüzeyi çıkarın, hava ile kurutun ve RNase içermeyen su ekleyin.
RNA'yı daha fazla analiz için depolayın.
Filtreleri içeren tüpleri soğuk tutmak için buz üzerinde eritiyorum. Sonra her tüpe 650 mikrolitre soğuk asetat EDTA veya AE tamponu ekleyin.
Mümk
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin