JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:18 dk. • March 31st, 2026
Bir toprak bakterisinin izole kolonilerini içeren bir kültür plakası ile başlayın.
Bir koloniyi besin ortamı içeren şaşkın bir kültür şişesine aşılayın.
Kültürü sallama ile kuluçkaya geçirin.
Şaşırtılmış matara, sarsıntı sırasında türbülansı artıran iç çıkıntılara sahiptir ve havalandırmayı artırır.
Bu süreç, eşit oksijen dağılımını sağlar ve hücrelerin topaklanmasını ve tortulmasını önler; böylece besin dağılımı eşit şekilde yayılabilir.
Bakteriler hızla çoğalır ve uniform fizyolojik özellikler sergileyen hücrelerle yoğun bir süspansiyon oluşturur.
Düzenli aralıklarla bir küvette bir örnek alın.
Bir spektrofotometre kullanarak, ışığı numuneden geçirin. Geçiriji ışık miktarı, optik yoğunluk veya OD olarak bilinen bakteri büyümesini niceltmek için ölçülür.
Bu aşamadaki hücreler yüksek metabolik olarak aktiftir ve bu nedenle verimli bakteriyofaj enfeksiyonuna karşı en hassas olan bu aşamada eksenensial ve erken durağan fazda seçilmiş bakteriyel kültürlerdir.
Arthrobacter hücreleri, LB agar plakasında çizgili kolonilerden iki ila üç gün boyunca 30 derece Celsius sıcaklıkta kuluçka halinde kültürlenir.
Steril bir halka kullanarak bir koloni seçin ve 50 mililitre LB suyuna bir kültür şişesinde ekleyin. enfeksiyonu deneyleri için üstel veya erken durağan faz hücreleri elde etmek amacıyla, 225 rpm'de 30 derece Celsius'ta sallanan bir kuluçka makinesinde, yaklaşık 24 saat kuluçka yapın.
Hücrelerin orta ve geç sabit büyüme durumuna girmesini önlemek için bakteriyel büyüme durumunu yakından izleyin. izolasyonu için ideal OD600 0.5 ile 0.7 arasındadır.