JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:47 dk. • March 31st, 2026
Sırtı tıraş edilmiş anestezi altında bir fareyle başlayın.
Faresi, sırt yatay kalması için karnının altına bir Petri kabı kapağı yerleştirin.
Bir pirinç bloğu, içinde kaynar su olan bir beğere daldırın, ısınana kadar.
Bu arada, deri altı enjeksiyonla bir ağrı aljezik uygulanır.
Sonra, ısıtılmış pirinç bloğu farenin tıraşlı sırtına bastırın.
Isı, cildin en dış tabakası olan epidermise zarar verir ve alttaki dokuya yayılarak yanık yarası oluşturur.
Bloğu çıkarın ve dehidrasyonu önlemek için deri altına salin enjekte edin.
Sonra, bir tampon içinde asılı kalan patojenik bakterilerden oluşan bir inokulum uygulanır.
Bakterileri yaraya eşit şekilde yaymak için steril pamuklu çubuk kullanın.
Bakteriler, yüzey proteinleri kullanarak hücre reseptörlerine bağlanır, kolonizasyona başlar, koruyucu bir biyofilm oluşturur ve lokal bir enfeksiyon oluşturur.
Bu fare yanık enfeksiyonu modeli, konak-patojen etkileşim çalışmalarına hazırdır.
Bir fareyi anestezi ettikten sonra, metin protokolüne göre, 50 bıçaklı bir saç makası kullanarak farenin sırtını tıraş edin ve mümkün olduğunca çok deriyi açığa çıkarın. Sonra, fare karnının altına 35 milimetrelik bir petri kabının kapağını yerleştirerek sırtı nispeten yatay bir konumda tutun.
150 mililitrelik bir beakerde suyu kaynatmak için 10 inç x 10 inç ölçüsünde 220 VAC sıcak plaka kullanın. Su ile termal dengeye ulaşana kadar pirinç bir bloğu beaker'e daldırın. Yanık yaralanması oluşmadan önce, ağrı gidermek için önleyici ağrı aljezikleri deri altına enjeksiyon yapın.
On dakika sonra, termal eldiven takarak, ısıtılmış pirinç bloğu farenin arkasındaki tıraş edilmiş alana yedi saniye boyunca nazikçe bastırarak yanık yaralarını tetikleyin. Deri altı enjeksiyonlarla 0,5 mililitre steril salin verin. Termal yaralanmanın başlanmasından beş dakika sonra, bir pipet kullanarak PBS'de 5 kat 10 ile altıncı CFU içeren bakteri süspansiyonu 50 mikrolitre fare yanıklarına aşılayın.
Sonra, steril pamuk çubuğunu cilde zikzak hareketiyle hareket ettirerek, yanıklara aliquot sürerek bakteri hücrelerinin yanmış bölgedeki mümkün olduğunca eşit dağıtılması sağlanır.