JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:40 dk • March 31st, 2026
Sırt yatay kalması için karnının altına Petri kabı koyarak anestezi edilmiş bir fareyle başlayın.
Farenin sırtında, Gram-negatif bakteriyel bir patojen olan Acinetobacter baumannii ile enfekte edilmiş bir yanık yarası vardır.
Bakteriler, biyolüminesans operonu taşımak üzere genetik olarak tasarlanmıştır.
Fareyi optimal sıcaklıkta tutulan bir biyolüminesans görüntüleme odasına yerleştirin ve görüntülemeye başlayın.
Enfeksiyon noktasında, biolüminesans operonunun luxA ve luxB genleri lusiferaz enzimini kodlar. luxCDE genleri, lusiferaz substratını sentezleyen enzimleri kodlar.
Lusiferaz, substrat oksidasyonunu katalize eder ve görünür ışık üreterek bakteriyi parlak hale getirir.
Biyolüminesans sinyali, yara bölgesinde metabolik olarak aktif bakterilerin varlığını gösterir.
Görüntüleme yazılımı kullanılarak, biyolüminesans sinyal yoğunluğunu nicelikten ölçerek canlı bakteri yükünü tahmin edin.
Aşıdan hemen sonra, canlı görüntüleme yazılımını başlatarak biyolüminesans görüntüleme yapın. Kontrol panelinde, başlat tuşuna tıklayın. Sonra sıcaklık kutusunun rengi yeşile dönene kadar beklen, bu da numune odasındaki aşamanın sıcaklığının 37 derece Celsius'a ulaştığını gösterir.
Anestezi edilmiş fareyi numune odasındaki sıcak aşamaya yerleştirin; enfekte yanıklar doğrudan kameranın altına yerleştirilir. Sonra, kontrol panelinde "Luminescence" yerine bir işaret koyun.
Sonra "Otomatik pozlama" seçeneğini seçin, böylece görüntüleme süresi biyolüminesans yoğunluğuna göre canlı görüntüleme yazılımı tarafından optimize edilecektir. "Görüş Alanı" açılır menüsünden "C" seçin. Yazılımın odak mesafesini belirlemesi için orta aralık tarama seçeneğini seçin.
Sonra üst üste bir işaret ekleyin. Şimdi, görüntüyü yakalamak için "Acquire" seçeneğine tıklayın. Sonra, "Image Label'ı Düzenle" kutusunda ok'a tıklayın. Bir "Görüntü Penceresi" ve "Ücret Paleti" görünecektir. Otomatik seçim için Otomatik ROI parametrelerini ayarlayın.