JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:47 dk. • March 31st, 2026
Delikli bir mikroskop slaytıyla başlayın ve delikli bölgeye dairesel bir doku biyopsisi yerleştirin.
Sonra, üzerine kauçuk bir conta yerleştirin.
Bu montajı çevirip metal perfüzyon odası çerçevesinin alt kısmına yerleştirin.
Üst çerçeveyi alt ile hizalayıp sabitleyin.
Uniform haznesinin yüksekliğini doğrulamak için bir kaliper kullanın.
Oda, pompaya bağlıdır; pompa ise tampon içinde asılı bakterileri içeren bir rezervuara bağlanır.
Bakteriyel süspansiyonun odaya perfüzyon edilmesini başlatın.
Sürgüdeki merkezi perforasyon, bakteriyel süspansiyonun montaja girmesini sağlar.
Bu, bakteri ile doku yüzeyi arasındaki etkileşimi mümkün kılarak yapışma ve kolonizasyonu teşvik eder.
Bu kurulum, dokuda in vivo bakteri kolonizasyonunu taklit eden bir in vitro model oluşturur.
Protokole başlamak için, önceden hazırlanmış 10 milimetre çapında bir doku biyopsisi, aynı kalınlıkta bir mikroskop slaytı ile sekiz milimetrelik dairesel perforasyon arasında ve bakteriyel süspansiyona temas etmek için iç yüzeyi yukarıya bakan kauçuk bir conta yerleştirin.
Tutucuya yerleştirilirken doku greftinin yönüne odaklanın. Dokunun iç yüzeyinin zaten kan dolaşımına maruz kaldığından emin olun, deneysel ortamınızla temas etmek için yüzü yukarı.
Sonra, tutucunu, mendille birlikte odanın alt metal çerçevesine gömülü conta tabakasına yerleştirin.
Üst metal çerçeveyi ve ilgili conta levhasını önceden yerleştirilmiş doku tutucuyla odanın altına takın. Sonra tüm hazneyi sekiz vida ve vida somunlarıyla monte edin. Bir kaliper veya cetvel kullanarak greftler arasında odanın yüksekliğinin her zaman aynı olduğundan emin olun.
Sonra akış odasını peristaltik pompaya bağlayın. Sonra 400 mililitrelik sıvı rezervuarını borulara bağlayın. Dokuları, peristaltik pompa ve bakteri rezervuarı kullanılarak bir saat boyunca fosfatla tamponlanmış tuzlu birimle, on mililitrelik on mililitrelik süspansiyon ile perüze yapın; bu, peristaltik pompa ve bakteri rezervuarı kullanılarak bir saat boyunca dakikada dört mililitre akış hızı ile fosfat tamponlu tuzlu birimlerde. Aynı toplama rezervuarı kullanılarak 100 mililitrelik bakteri süspansiyonunu sürekli olarak tekrar dolaştırın.