JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:15 dk • March 31st, 2026
Kontrollü koşullarda büyüyen mısır fidanlarıyla başlayın ve ev sahibi olarak hizmet verin.
Sonra, bitki patojenik bir bakteri olan Agrobacterium tumefaciens'i alın.
Mühendislik yapımı bakteriler, rekombinant bir viral genomu kodlayan bir T-DNA yapısı taşır. Bu genom, hedef mısır genini susturmak için tasarlanmış bir gen parçası içerir.
Bakteriyi, bitkinin en alt düğümü olan koleoptiler düğümün hemen üstüne enjekte edin, süspansiyon koleoptili doldurana kadar ve iç dokulara ulaşımı sağlar.
Enjeksiyon noktasında, bakteriler viral genomu taşıyan T-DNA'yı mısır hücrelerine aktarır ve burada viral RNA'ya transkribe edilir ve bu RNA sitoplazmaya taşınır.
RNA, viral protein üretimini çoğalır ve tetikler, yeni viral parçacıklar oluşturur ve bu parçacıklar sistematik olarak yayılarak enfeksiyonu oluşturur.
İstenen gen parçasını taşıyan viral RNA, bitkinin RNA girişim mekanizmasını aktive eder, spesifik mısır mRNA'larını bozur ve hedef geni sustur.
Bu, enfekte bitkiler büyüdükçe hedef gen tarafından düzenlenen fenotiplerde görünür değişikliklere yol açar; örneğin nekrotik lezyon oluşumu gibi, başarılı gen susturmalarını doğrular.
Agrobacterium'u enjekte etmek için 4 ila 7 günlük mısır fidanları kullanın. Şırıngayı ve iğneyi birleştirin. Bakteriyel süspansiyonu, koleoptilular düğümün 2-3 milimetre yukarısına nazikçe enjekte edin, ta ki koleoptili doldurana veya bitkilerin büyüme evresine bağlı olarak girdada görünür hale gelene kadar.
Tüm fideleri enjekte edin ve her yapıya enjekte etmek için şırınga ile iğneleri değiştirin. Kontrol genlerini, lezyon 22 taklitini veya yapraklardaki fitoen desaturazını susturarak fenotipik enfeksiyonu doğrulamak.