JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:30 dk. • February 26th, 2026
Biyoanaliz plakalarıyla başlayın; biri besin agarının sol tarafında Corynebacterium propinquum ile önceden kolonize edilmiş ve diğeri yalnızca besin agar içerir.
Sonra, patojenik Staphylococcus süspansiyonu içeren çok kuyu bir plaka alın.
Kuyulara bir aşılama damgası indirin, uçları Staphylococcus kültürüne daldırır.
Damgayı çevirin, sonra kaldırın ve her ucunda tutarlı aşılama sağlamak için eşit bir damla taşıdığından emin olun.
Damgayı, mevcut kolonilerle temas etmeden kaçınarak biyoanaliz plakasının sağ tarafıyla hizalanın.
Damgayı çıkarın, agar'da Staphylococcus inoculum lekeleri bırakın.
Monokültür oluşturmak için sadece agar plakasında damgalama tekrarlanın. Plakaları ters çevirerek kuluçka edin.
Ortak kültürde, C. propinquum , agardan demiri toplayan küçük moleküller olan sideroforlar salgılar ve böylece Staphylococcus'un büyümesini engeller.
Kuluçka sonrası dönemde, Staphylococcus büyümesinin ortak kültür ve monokültürde büyümesini karşılaştırın.
Ortak kültürde önemli bir inhibitisiyon, iki tür arasında etkileşim olduğunu gösteriyor.
Biyoanaliz plakasının altı günlük kuluçkasından sonra, hedef organizmanın daha önce tarif edildiği gibi gece boyunca kültürleri hazırlanır. Hedef plakayı, boş 12 kuyruklu plakanın her kuyusunu 1,8 mililitre BHI ve 200 mikrolitre hedef gece kültürü ile doldurarak hazırlayın. Hedef plakaya steril bir aşılama damgası yerleştirin.
Kuyular etrafındaki kültürleri nazikçe karıştırın, böylece komşu kuyuları çapraz kirletmelerinden emin olun. Aşılama damgasını kaldırın ve her damga ucunda seyreltilmiş hedef kültür damlası olduğundan emin olun. Aşılama damgasını aşılanmamış bir biyoanaliz tabağına yerleştirin ve damgayı nazikçe sallayın, böylece kültür damlası her kuyuyu aşılasın.
Damga çıkarıldıktan sonra, kuyularda bir damla kültür görünür olmalıdır. Eğer herhangi bir kuyuya aşılama damgası uygulanmadıysa, pipet kullanarak kuyulara 3 mikrolitre gece boyunca seyreltilmiş kültür yerleştirin. Daha sonra, daha önce tarif edildiği gibi biyoanaliz plakalarını aşılayın, ancak damga uçlarını 12 delikli plakanın sağ tarafıyla hizalayarak damganın mevcut bakteri kolonisiyle temas etmemesini sağlayın. Damgayı dikkatlice çıkarın ve hedef plakaya geri yerleştirin.
Eğer agar kuyular içinde eşit olmayan şekilde katılmışsa, damgayı nazikçe ileri geri sallayın, ancak damgayı test organizma büyümesine kaydırmamaya dikkat edin.
Her biyoanaliz plakası için aşılamayı tekrarlayın, tüm plakalar aşılanana kadar, ardından plakaları uygun sıcaklıkta ters yedi gün boyunca kuluçka edin.
Test ve hedef organizmayı bir hafta boyunca birlikte kültürlendikten sonra, etkileşimleri görsel değerlendirmeye göre puanlayın. Kuyyuları, monokültürden ayırt edilemez büyüme gösteren hedef organizma büyümesi sıfır olarak puanlayın. Azalmış büyüme olan kuyuları bir, büyümesiz iki olarak puanlayın.