JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:30 dk. • February 26th, 2026
Steril kumda yetiştirilen domates fidanlarını içeren kaplar alın.
Fide kökleri, selüloz üreten yabani tip veya selüloz eksikliği olan mutant bitki patojenik bakteri suşuyla aşılanır.
Bir kaptan sızdırmazlık malzemesini çıkarın, steril kağıda ters çevirin ve bitkiyi içeren kum silindirini boşaltmak için musluk kullanın.
Kum silindirini uzununa ikiye bölünerek kökü ortaya çıkarın.
Sonra kökü steril bir tampona batırın ve gevşek yapışmış bakterileri çıkarmak için çalkalayarak.
Diğer kök için süreci tekrarlayın.
Yıkanmış kökleri taze bir tampona aktarın. Onları sonikle yaparak sıkı yapışmış bakterileri serbest bırakın.
Bu sonikli süspansiyonları seri sulandırmalar hazırlamak için kullanın, agar'a kaplama yapın ve canlı bakterilerin koloni oluşturmasını sağlamak için kuluçka yapın.
Vahşi tip suşta daha yüksek canlı sayılar, selüloz eksikliği olan mutanta kıyasla, selüloz fibrillerinin bakteriyellerin kök yüzeyine yapışmasını teşvik etmedeki kritik rolünü vurgulamaktadır.
Kumda yetişen bitkilerde bulunan canlı bakteri sayısını belirlemek için, kabın üst ve altından sızdırmazlık malzemesini çıkararak başlayın.
Kabı steril bir kağıdın üzerine koyun ve kabı yüzeye hafifçe vurarak kumu gevşetmekten sonra bitkiyle birlikte kabı kaptan nazikçe kaldırın.
Kum silindiri ve bitki kağıt üzerinde serbest kaldığında, kumu ortadan ikiye bölerek bitki kökünü ortaya çıkarın. İsterseniz, kabın kenarına yakın ve kök yakınından kum örnekleri alın. Bu, bakterilerin yayılımını, birikimini ve büyümesini belirlemek için faydalı olabilir.
Kökü alıp gevşek yapışmış kum ve bakterileri ölçülü su veya tampon hacmine batırıp nazikçe sallayarak çıkarın. Ortaya çıkan süspansiyondaki bakterilerin canlı hücre sayısını, uygun bir ortam (örneğin Luria agar) üzerine kaplama yaparak belirleyin. Bu, kökle gevşek şekilde ilişkili bakteri sayısını temsil eder. Son olarak, sıkı bağlı bakterileri sonikasyon ile uzaklaştırın ve sayılarını belirleyin.