Bakterilerde Morfolojik Değişikliklerin Canlı Hücre Floresan Mikroskopisi Kullanılarak Görüntülenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:15 dk. • March 31st, 2026
Bir bakteri kültürüyle başlayın, cam tabanlı bir tabada agaroz levha altında immobilize edilmiş.
Bakteriyel hücre zarları floresan bir boya ile etiketlenmiştir.
Bakteriler ayrıca, belirli bir mRNA'yı hedef alan ve temel hücre bölünme proteininin üretimini engelleyen antisens RNA ifade etmek üzere tasarlanmıştır.
Ters floresans mikroskobunun hedefine bir damla daldırma yağı ekleyin.
Çaneyi metal bir gövdeye yerleştirin ve mikroskop aşamasına sabitleyin.
Objektif yağ çanakla temas edene kadar yükseltin, sonra hücrelere odaklanın.
Birden fazla derinlikte görüntü yakalamak için Z-yığınlarını ayarlamak için görüntüleme yazılımı kullanın.
Floresans zaman geçişli görüntüler elde etmeye başlayın.
Hücreler antisens RNA ifadesine yanıt verdikçe bölünmez ve şişmiş şekiller geliştirirler.
Zar organizasyonu bozulur ve bu da dengesiz ve odaklı floresans ile sonuçlanır ve bu da kusurlu hücre bölünmesini gösterir.
Örneği görüntülemek için, mikroskopu mikroskop yazılımında başlatmadan önce hedefin tamamen aşağı indirildiğinden emin olmak için kaba ayar odak düğmesini kullanın. 100X yağ batırılma hedefine 1.517 kırma indisiyle bir damla bırakın ve numuneyi içeren cam taban kabını metal gövde tabutuna aktarın.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin