Listeria monocytogenes'in kuyruk venine enjeksiyonu sonrası fare kalbinde bakteriyel yükün nicelendirilmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 4:21 dk • March 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kısıtlanmış bir fare alın ve enjeksiyon bölgesindeki kontaminasyonu azaltmak ve damarı genişletmek için kuyruğunu alkolle temizleyin.

Kuyruk damarına patojenik bir bakteri olan Listeria monocytogenes'i enjekte ederek doğrudan kan dolaşımına ulaştırın.

Enjeksiyon yerine hafif bir baskı uygulayarak kanamayı durdurun, ardından farenin toparlanmasına izin verin.

Enjekte edilen bakteriler sistematik olarak dolaşır ve kalbe ulaşır. Daha sonra kalbi kolonileştirerek enfeksiyon oluştururlar.

Daha sonra, ötenazi edilmiş fareden patojenle enfekte kalbi alın.

Dokudan bakterileri salmak için bir homojenizer kullanarak kalbi homojenleştirin.

Homojenatın çok kuyu bir plakada seri seyreltmeleri yapılabilir.

Her seyreltmeden elde edilen küçük hacimleri bir agar tabağına yerleştirin ve kurumasına izin verin.

Plakayı inkubka ederek bakterilerin çoğalmasını ve görünür koloniler oluşturmasını sağlayın.

Enfekte fare kalbindeki bakteri yükünü belirlemek için kolonileri sayın.

L'yi aşılamak için. Farelere monositogenler, bir hayvanı enjeksiyon sırasında tutmak için bir koşum koşusuna yerleştirir. Enjeksiyon bölgesini temizlemek ve kuyruk damarını genişletmek için alkol pediyle temizleyin.

Sonra, 1 mililitrelik bir şırınga ve 27,5 gauge iğneyle, farenin kuyruk damarına istenen kültürden 200 mikrolitre nazikçe enjekte edilir. Hayvanı yeni bir kafese yerleştirmeden önce enjeksiyondan kaynaklanabilecek kanamayı durdurmak için kağıt havlu kullanın. Hayvanlar 72 saat sonra kurban edildikten sonra, biyogüvenlik dolabının altındaki metin protokolüne göre hayvanı bir diseksiyon bloğuna sabitleyin ve %70 etanol kullanarak doygunlaştırın.

Karın ve göğüs bölgesinde vajinal açıklıktan xiphoid sürecine kadar uzanan ve her iki kolun aksillerine kadar uzanan Y şeklinde bir kesi yapın. Deriyi geri çekin, bacaklardaki iğneleri çıkarın ve diseksiyanı açık tutmak için kullanın; peritoneumu nazikçe keserek bağırsakları, mideyi, karaciğeri ve dalağı açığa çıkarın.

Şimdi, diyaframı konumlandırın ve göğüs kafesini nazikçe keserek göğüs hakkını görselleştirin. Xiphoid kısmını ve göğüs gövdesini boyuna kadar keserek göğüs bölgesini açın, kalp ve akciğerler ortaya çıkar. Pens kullanarak, kalbi nazikçe tepesinden tutup kaldırarak aort ve akciğer damarlarında gerilim yaratın. Sonra damarları kesip kalbi serbest bırakın ve ayrı bir su tüpüne yerleştirin.

Metin protokolüne göre bir homojenizer hazırlandıktan sonra, bir karaciğeri en az iki dakika boyunca veya organın görünür kısmı kalana kadar homojenize edin. Probdan büyük kalıntıları çıkarmak için cımbız kullanın.

Tüm organ örnekleri homojenize edildikten sonra, karaciğer ve dalak örnekleri için 1'den 10'a, 10'dan 10,000'e kadar ve kalp için 1'den 10'a 10'dan 1000'e kadar seri seyreltmeler hazırlanır. Sulandırmaları önceden ısıtılmış LB agar plakalarına spot tabaka ile yerleştirin. Seyreltilmemiş örnekler, organların yeterince enfekte olduğundan emin olmak için ayrı plakalar üzerine yerleştirilebilir.

Plakalar kuruduktan sonra, plakaları 37 derece Celsius sıcaklıkta kuluçka makinesine yerleştirin. Parafilm kullanarak seyreltilmiş örneklerin 96 kuyu levhalarını sarın ve -80 derece Celsius dondurucuya yerleştirin.

Ertesi gün, koloni sayısını sayın ve seyreltmeleri kullanarak organ başına toplam bakteri sayısını hesaplayın.

07:00

Tüberküloz Mycobacterium marinum enfekte yetişkin zebra balığı içinde modelleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:55

Drosophila Mikrobiyomuna Uygulanan 96 Delikli Plaka Formatında Hızlı Koloni Oluşturma Birimi Sayımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:21

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:50

Ile Enfekte Fare Bakteriyel Yük ve Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Listeria monocytogenes

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:42

Kronik bağırsak enfeksiyonu fare modelinde doku bakteriyel yükünün nicelendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:19

Fare kalp dokusunda bakteriyel mikrolezyonların mikroskobik görselleştirmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:02

Fare kalp dokusu bölümünde bakteri dolu mikrolezyonların görüntüleme için immünbojenlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:52

Quantification of Bacterial Load in Mouse Spleen and Liver After Systemic Infection

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:33

Konak Hücrelerde Bakteriyel Enfeksiyonun Koloni Oluşturan Birim Testi ile Miktar Tayini

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:18

Listeria monocytogenes Enfeksiyonunu Takiben Bir Fare Beyninde Bakteriyel Kolonizasyonun Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026