JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:02 dk. • February 26th, 2026
Patojenik bir bakteri olan Streptococcus pneumoniae ile enfekte edilmiş bir fareden kimyasal olarak sabitlenmiş bir kalp dokusu kesitini içeren bir slaytla başlayın.
Bu enfeksiyon, kalp kaslarında ekstrahücresel, bakteri dolu mikrolezyonların oluşmasına neden olur.
Bölümü bir tamponla yıkayarak kalan fiksatifleri çıkar.
Konak hücre zarlarını geçirimlileştirmek için iyon olmayan bir deterjan uygulayın.
Kalan deterjanı temizlemek için tekrar yıkayın.
Bölümü, spesifik olmayan bağlanma bölgelerini engellemek için bir bloklayıcı ajanla inkübe yapın.
Bağlanmamış engelleyici maddeyi çıkarmak için durulayın.
Bakterinin kapsül polisakkaridine bağlanan birincil bir antikor ekleyin.
Bağlanmamış antikoru çıkarmak için yıkay, ardından birincil antikora bağlanan yeşil florofor etiketli ikincil antikor ekleyin.
Konak hücre çekirdeklerini etiketlemek için nükleer boyayla karşı boya.
Bölümü yıkayın ve montaj ortamı ile monte edin.
Mikrolezyonlar içindeki etiketlenmiş bakterileri görselleştirmek için konfokal mikroskopi kullanarak bölümü gözlemleyin.
Pozitif yüklü cam slaytlarda 5 mikronluk bir kalp kesiti kullanarak, önce bölümleri dondurun, sonra eritip hava kurumasına izin verin. Slaytları %10 nötr tamponlu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin