JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:33 dk. • February 26th, 2026
Yüzeye bağlı bakteriler ve planktonik veya serbest yüzen bakteriler içeren plakalarla başlayın.
Her iki numuneye de amip hücreleri ekleyin.
Her numunenin üzerine hücre geçirimli bir boya olan Kalsein-içeren bir agaroz pedi yerleştirin.
Fazla sıvıyı çıkarın, kurumasına izin verin ve tabakları kuluçka altına alın.
Yüzeye bağlı bakterilerin bulunduğu plakada, yüzey teması virülans genlerini yukarıdan düzenleyerek toksinleri ifade eder.
Bu toksinler amip zarını bozur ve şeklini değiştirir.
Hasarlı amip zarı, daha fazla kalsein-'nin sitoplazmaya girmesine izin verir; hücre içi esteraslar ise onları floresan kalseine ayırarak birikmesine yol açar.
Buna karşılık, yüzey teması olmayan planktonik bakteriler virulent olmaya devam eder ve amip zarlarını sağlam bırakır. Bu, Calcein-'nin amipe girişini azaltır ve floresan kalsein birikimini sınırlar.
Sağlıklı amipler de virulent olmayan bakterileri yutar.
Flüoresan mikroskop altında, parlak, yuvarlak amip hücreleri virulent bakteriyel etkileşimi gösterirken, loş, amorf amipler virulent olmayan bakteriyel etkileşimi gösterir.
Yüzeye bağlı bakteri hücrelerinin virülansını test etmek için, daha önce elde edilen yüzeye bağlı bakteri hücrelerinden 10 mikrolitre amip hücresi eklenebilir.
Planktonik hücreleri izole etmek için, kültürden 10 mikrolitre taze bir petri kabına aktarılır.
Sonra, daha önce elde edilen planktonik bakterilerle 10 mikrolitre amip hücresi karıştırarak planktonik hücrelerin virülansını analiz edin.
Küçük agar pedini hemen uygun bakteri amip karışımının üzerine petri kabı yüzeyine yerleştirin.
Sonra, fazla sıvıyı nazikçe pipetle alın ve tabağın 20 dakika boyunca kurumasına izin verin.
Kabı kapağıyla kapatın ve oda sıcaklığında 40 dakika daha kuluçka yapın. Son olarak, en az 100 amip hücresinin görüntülerini almak için floresans mikroskobu kullanın.