JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:03 dk • February 26th, 2026
Patojenik bakterilerle önceden enfekte edilmiş bir fare dalağı ile başlayın.
Dalağı soğuk fosfatla tamponlanmış tuzlu suyuna yerleştirerek bakteriyel canlılığı koruyun.
Bir homojenizatör kullanarak, dalağı mekanik olarak bozmak ve hücre içi bakterileri tampona salmak için homojenleştirin.
Bu, dalak içindeki toplam bakteri yükünü yansıtan bir bakteri süspansiyonu oluşturur.
Doğru bakteri sayısı belirlemek için çözelti bakteri yoğunluğunu azaltmak amacıyla homojenatın seri seyreltmeleri yapılması.
Sonra, iki bölüme ayrılmış bir besin agar tabağı alın.
Aynı bakteri seyreltmesini agar plakasının her bölümüne yerleştirerek çoğaltmalar oluşturulur.
Plakanın kurumasına izin verin, sonra ters çevirin ve kuluçka yapın. İnkubasyon sırasında, canlı bakteriler çoğalır ve ayrı koloniler oluşturur.
Plakanın her bölümündeki kolonileri sayarak enfeksiyon sırasında dalaktaki toplam bakteri yükünü temsil eden ortalama koloni oluşum birimlerini (CFU'ları) hesaplayın.
Dalak 15 mililitrelik bir tüpte ve içinde iki mililitre PBS bulunur. Sonrasında, her örnek için dokuları buz üzerinde maserasyon yapmak için tek tek kullanımlık homojenizatörler kullanın, ardından doku çamurlarının seri seyreltilmesi yapılır.
Sulandırmaları tek bir TSA plakasının ayrı taraflarına çift olarak plaka ile yerleştirin ve örneklerin kısa süreliğine kurumasına izin verin. Sonra, plakaları ters çevirip örnekleri gece boyunca statik 37 derece Celsius kuluçka makinesinde kültürleyin; plakanın her iki tarafındaki bakteri kolonilerini ve ertesi sabah her seyreltmeden alınan bakteri kolonilerini ortalamaya alın.