JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:57 dk. • February 26th, 2026
Besin açısından zengin bir ortamda yetiştirilen toprak bakterisi olan Bacillus subtilis kültürüne başlayın.
Santrifüj yaparak bakterileri pellet eder, süpernatı atır ve ardından pelleti biyofilm oluşumunu destekleyen kimyasal olarak tanımlanmış bir ortamda yeniden süspansiyona yerleştirir.
Uygun bakteri konsantrasyonunu belirlemek için kültürün optik yoğunluğunu ölçün.
Kültürü, kontrol için tanımlanmış ortam içeren kuyulara ve test için bir inhibitörle tanımlanmış ortam içeren kuyulara ekleyin.
Statik koşullarda kuluçka yapın. Bakteriler yukarı doğru göç eder ve hava-sıvı arayüzünde birikir; burada artan oksijen bulunabilirliği bakteri büyümesini destekler.
Kontrol kuyusunda, arayüzdeki bakteriler ekstrasellüler matriks bileşenleri salgılar ve bakterilerin hayatta kalmasını artıran koruyucu bir tabaka olan pellicle adı verilen yüzen bir biyofilm oluştururlar.
Test kuyusunda inhibitör matriks sentezini bozarak dağılmış bakteri popülasyonlarına yol açar.
Bu test, inhibitörlerin biyofilm oluşumunu engellediğini ve bunun bakteriyel patogenezin temel bir özelliği olduğunu göstermektedir.
Öncelikle, uygun tek bir koloni seçin ve 3 mililitrelik LB çorbasına aktarın. Bu başlangıç kültürünü 37 derece Celsius'ta 4 saat boyunca sallanan bir kuluçka makinesine yerleştirin. İnkubasyondan sonra, 1,5 mililitre başlangıç kültürünü alın ve dört dakika boyunca santrifüj yapın.
Süpernatantı dikkatlice çıkarın ve ardından pelleti 1,5 mililitre MSgg ortamında tekrar askıya alın. Pelikül yetiştirmek için, her kuyuya 3 mililitre MSgg ekleyerek 12 kuyruklu bir hücre kültürü plakası hazırlayın. Bu kuyulardan bazılarına, kenar etkilerini önlemek için küçük bir molekül inhibitörü ile MSgg'yi konsantrasyon aralığında küçük bir molekül inhibitörüyle ekleyin; böylece farklı konsantrasyonların yerleşimi tabak etrafında dağıtılır.
Yeniden askıya alınmış başlangıç kültürünün 600 nanometresinde optik yoğunluğu ölçün. Kültür 0.6 ile 1 arasında olmalı. Bu, sistemin dayanıklılığı için kritik öneme sahiptir.
Kültür plakasının her bir kuyusunu 3 mikrolitre yeniden askıya alınmış başlangıç kültürü ile aşılayın. Sonra, plakayı statik koşullarda üç gün boyunca 23 derece Celsius sıcaklıkta kuluçka edin. Sonrasında tabağı kuluçka makinesinden çıkarın ve pellikülleri gözlemleyin.