Biyofilm Matris Bütünlüğünü Değerlendirmek İçin Etanol Direnç Testi

Besin agar üzerinde yetiştirilen patojenik bakteri kaynaklı biyofilmleri ele alalım.

İşlenmemiş biyofilm, koruyucu bir hücre dışı matriks içinde yoğun şekilde paketlenmiş bakterileri içerir.

İnhibörü ile işlenmiş biyofilm, seyrek bir matriks içinde gevşek ilişkili hücreleri içerir.

Her biyofilmi ikiye böl, ardından bir yarısını kontrol amaçlı tamponla, diğer yarısını ise antimikrobiyal stres için etanole maruz bırakın.

Tedavi edilmemiş, etanole maruz kalan biyofilmde, yoğun matriks etanol difüzyonu azaltır ve hücre nüfuzunu sınırlar, böylece bakteriyel öldürme daha az olur.

İnhibörüyle işlenmiş ve etanole maruz kalan biyofilmde, seyrek matriks etanolün daha kolay nüfuz etmesini sağlar ve bu da bakteriyel öldürmeyi daha fazla sağlar.

Tüpleri santrifüj edin ve süpernatantı çıkarın. Hücreleri dağıtmak için tampon ve sonikat ekleyin.

Sulandırılmış süspansiyonları tabakalayın ve canlı bakterilerin büyümesini sağlamak için kuluçka yapın.

Koloni kuran birimleri (CFU'lar) sayın; inhibitörle işlenmiş ve etanole maruz kalan biyofilmden elde edilen daha az CFU, matris bütünlüğünün etanol direnci için gerekli olduğunu doğrular.

Temiz bir jilet bıçağını alın ve biyofilm kolonilerini şablonun yardımıyla