Kistik Fibroz Hastalarından Balgam Filtratları Tarafından İndüklenen Bakteriyel Biyofilmlerin Konfokal Görüntülemesi

Yapışmış bakteriler içeren odalı bir örtü camını, kistik fibroz, hasta kaynaklı balgam filtratı ile takviye edilmiş bir ortamda ve yalnızca ortamda inkübe edin.

Balgam filtratı, bakteriyel sinyal yollarını uyaran, matris üretimini ve biyofilm oluşumunu tetikleyen konaktan köken bileşenler içerir.

Biyofilmler oluştuktan sonra, serbest yüzen bakteriler ve kalıntı konaktan köken bileşenler içeren ortamı atabilirsiniz.

Gevşek yapışkan bakterileri çıkarmak için bir tampon ile yıkayın.

Membran geçirgen ve membran geçirmeyen floresan boyalar içeren bir boyama karışımı ekleyin ve karanlıkta kuluçka yapın.

Membran geçirimli boya, sağlam zarları çapraz geçerek hem canlı hem de yaşatmaz bakterileri etiketler. Buna karşılık, geçirimsiz boya sadece hasarlı membranlara girer ve canlı olmayan bakterileri seçici olarak etiketler.

İnkubasyondan sonra, boyama çözeltisini çıkarın ve tampon ile yıkayarak fazla boya gider ve arka plan floresansını azaltır.

Yeni bir ortam ekleyin ve konfokal mikroskopi kullanarak görüntüler alın.

Balgam filtratıyla yetiştirilen biyofilmlerde daha fazla kalınlık gösterilir ve bu da konaktan türetilen bileşenlerin biyofilm oluşumundaki rolünü vurgular.

Büyümenin ardından, oda kuyu