Fotosensitator öncüsü kullanılarak bakteriyel biyofilmlerin ışıkla aktif tedavisi

Dört deneysel gruba ayrılmış patojenik bir bakterinin biyofilmlerini içeren mikroplaka kuyularıyla başlayın.

Ortamı nazikçe aspire edin ve yapışmayan hücreleri çıkarmak için bir tamponla durulayın.

İki gruba fotoduyarlılaştırıcı öncül içeren bir tampon ekleyin, kalan iki gruba ise yalnızca tampon verilir.

Tüm grupları karanlıkta kuluçka altına alın, böylece öncül biyolojik film aracılığıyla yayılabilir, bakteri hücrelerine girebilir ve sitoplazma ile membranlar içinde biriken bir fotoduyarlıya metabolize edilir.

İnkubasyondan sonra, bir öncü işlenmiş grup ve sadece tampon içeren bir grup hafif ışınlamaya maruz bırakın.

Öncü ile işlenmiş grupta, ışık fotosensitizatörü uyarır; bu da enerjiyi moleküler oksijene aktarır ve reaktif oksijen türleri (ROS) oluşturur.

ROS, zarları bozar, proteinleri bozur ve DNA'yı parçalayarak bakteriyel hücre ölümüne yol açar.

Diğer üç durum ROS üretmez; çünkü ya öncül ya da ışık yoktur ve biyofilm etkilenmez.

96 kuyu bir plakada biyofilm üretmek için, önce bir -80 derece Celsius soğukta çözülmüş Staphylococcus aureus USA üç yüz biyofilme aşılanarak, beş mililitre tripton soya suyu veya TSB içeren bireysel 14 mililitrelik yuvarlak tabanlı tüplerde klinik suş kültürleri oluşturarak 37 derece Santi-celsius inkubatörde gece boyunca sallanarak alın. Kültürler durağan faza ulaştığında, bakteri hücrelerini santrifüjle yapın ve peletleri ve PBS'yi mililitre başına dokuzuncu koloniye 2 kat 10 birim oluşturarak yeniden askıya alın. Bu bakteriyel süspansiyonları 1'e 200 oranında seyreltirin ve TSB ortamında, sıfır nokta beş glukozla takviye edilip, her deneysel grup başına suş başına üç kuyuya, polistiren hücre kültüründe, 37 derece Celsius'ta 24 saatlik kuluçka içinde, oksijenle birlikte 96 delik mikroplaka ile işlenmiş bir polistiren hücre kültüründe, titremeden.

Ertesi gün, biyofilmleri bozmadan kuyuları PBS ile üç kez nazikçe yıkayın. Sonra, uygun deneysel kuyulara 200 mikrolitre taze hazırlanmış ALA ekleyin ve tabağı ışıktan korunarak bir saat boyunca 25 derece Celsius sıcaklığına yerleştirin. Sonra plakayı bir saat boyunca 100 miliwatt/santimetre kare ışık yoğunluğunda ışık yayan bir diyot ile ışınlayın.