Enfekte Fare Modelinden Dışkı Örneklerinde Clostridium difficile'nin Nicelleştirilmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 3:08 dk • March 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gastrointestinal traktı Clostridium difficile tarafından kolonileştirilen bir fareyle başlayın; bu patogen, anaerobik, spor oluşturan bakteriyel bir patogen.

Faresi kısırlaştırın ve doğal olarak steril, önceden tartılmış bir tüpte dışkılamasına izin verin.

Boş tüp ağırlığını toplam ağırlıktan çıkararak uygun seyreltmeler için dışkı örneğinin net ağırlığını belirleyin.

Numuneyi anaerobik bir ortama aktararak oksijene duyarlı bakterinin canlılığını koruyun.

Numuneye bir tampon ekleyin ve mekanik olarak bozarak içeriğini askıya alın.

Daha büyük kalıntıların yerleşmesini sağlamak için kuluçka, bakteri hücreleri ve sporları süpernatantta tutulur.

Buffer'daki üst yüzeyin seri seyreltmelerini gerçekleştirin.

Sulandırmaları seçici ortama örtün ve anaerobik koşullarda kuluçka yapın.

Bu ortam, sporların çimlenmesini ve Clostridium difficile'nin seçici büyümesini desteklerken, rakip bakterileri inhibe eder ve böylece ayrı koloniler oluşur.

Kolonileri sayarak dışkıdaki Clostridium difficile yükünü nicelikleştirin ve gastrointestinal kolonizasyonu değerlendirin.

Farelerden dışkı örnekleri toplamak için önce konu faresini boyun ve sırtındaki gevşek derisinden hafifçe ama sağlam bir şekilde tutarak hayvanın sıkıntı içinde olmadığından emin olun.

Serçe parmağını kullanarak hayvanın kuyruğunu nazikçe kaldırarak anüsü ortaya çıkar. Bilinen kilolu steril bir mikrosantrifüj tüpünü hayvanın anüsünün altına doğrudan tutun, böylece tüpün fareye doğrudan temas etmemesini sağlayın. Hayvan dışkı yaptığında, dışkı pelletini tüpten toplayın.

Tüm gerekli örnekler toplanana kadar tüpü oda sıcaklığında saklayın. Dışkı içeren tüpleri analitik bir tartıda tartın ve kütleyi dört ondalık basamakta kaydedin. Tüpün ağırlığını çıkararak dışkı pelletinin ağırlığını hesaplayın.

Sonra, içeriğin birden ona kadar seyreltilmesi hesaplayın ve 1x PBS'ye yeniden süzülün. Pipetin ucunu kullanarak dışkıyı nazikçe çözeltiye dönüştürün. Örnekleri oda sıcaklığında 30 dakika kuluçkaya geçirin, içeriğin çökmesini sağlayın.

Çözeltileri anaerobik olarak koruyarak, her örnek için 1x PBS ile seri seyreltmeler yapılabilir. Her seri seyreltmeden 100 mikrolitre TCCFA plakalarına aktarın. Steril L şeklinde bir yayıcı kullanın ve malzemeyi plakalara eşit şekilde uygulayın.

Plakaları anaerobik koşullarda 37 derece Celsius sıcaklıkta 24 saat boyunca kuluçka yapın. Son olarak, C.difficile kolonilerini sayın ve gram fekal içeriği başına koloni oluşum birimini hesaplayın.

12:58

Morfolojik Değişiklikleri Karakterize Eden Bir Protokol Clostridium difficile Antibiyotik Tedavisine Yanıt Vermek

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:12

Bir Protein Mikroarray tahlil antijen spesifik antikor yanıt aşağıdaki Clostridium difficile enfeksiyon serolojik belirlenmesi için

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:13

Clostridioides difficile için Larva Zebrabalığı Enfeksiyon Modeli nin Geliştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:42

Kronik bağırsak enfeksiyonu fare modelinde doku bakteriyel yükünün nicelendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:16

Fare Ortak Enfeksiyon Modelinde Bakteriyel Sayımı İçin Enfekte Dokuların İşlemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

01:45

Enfekte Farelerin Bağırsak Dokularındaki Amino Asit Metabolitlerinin Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:27

Clostridium difficile enfeksiyonunun fare modeli oluşturulması

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:52

Quantification of Bacterial Load in Mouse Spleen and Liver After Systemic Infection

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:04

Citrobacter rodentium Mouse Model: Bulaşıcı Kolit için çalışılması Patojen ve Host Katılımlar

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:38

4D modelli Görüntüleme Citrobacter rodentium Enfeksiyonlar

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026