JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:32 dk • March 31st, 2026
Topraksız bir sistemde sıvı büyüme ortamının yüzeyinde yüzen düşük yoğunluklu ağ destekler üzerinde yetiştirilen Arabidopsis thaliana fideleriyle başlayın.
Bu fideler, kökü kolonileştiren ve biyofilm oluşturan bakterilerle önceden aşılanmıştır.
Fidanı tutun ve sapı yaprakların altındaki penslerle nazikçe sıkıştırın.
Sonra, köke zarar vermeden fidanı ağdan kaldırarak kolonileştirilmiş kök yapısını koruyun.
Fideni, çift damıtılmış su içeren çok kuyuklu bir plakaya aktarın.
Plakayı folyo ile kaplayın ve çok uçlu bir sonikatör kullanarak örnekleri sonikle geçirerek biyofilmi bozup bakterileri kök yüzeyinden uzaklaştırın.
Sonikasyondan sonra, soniklenmiş bakteriyel süspansiyon kullanılarak seri seyreltmeler hazırlanır.
Sulandırılmış örnekleri agar plakalarına tabaklayın ve bakterileri eşit şekilde yaymak için cam boncuklar ekleyin.
Boncukları çıkarın ve canlı bakterilerin koloniler oluşturmasını sağlamak için plakaları kuluçkaya geçirin.
Koloni oluşumu, topraksız sistemde bakterilerin başarılı kök kolonileşmesini doğrular.
Durulama işleminden sonra, ağın yaprak tarafındaki yaprakların altına nazikçe alevle sterilize edilmiş forseps yerleştirerek fideleri ağdan çıkarın. Sapı hafifçe çimdik ve fideleri ağdan yukarı ve uzaklaştırarak kökü kırmadan çıkarın. Bitki köklerinden bakterileri çıkarmak için, her ağdan fideleri bir mililitre çift damıtılmış su içeren 24 kuyruklu sonikasyon plakasının ayrı kuyularına aktarın.
Plaka içindeki tüm örnekleri bir anda sonikle, el yazmasında tarif edildiği gibi çok uçlu bir sonikatör kullanarak sonikle. Bakterileri niceliklendirmek için, soniklenmiş örneklerin bakteriyel büyüme ortamında seri 10 seyreltilmesi yapılabilir. Steril cam boncuklarla yayın ve bakteriler için optimal sıcaklıkta kuluçka yapın, ta ki bireysel koloni sayılabilen hale gelene kadar.