$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Öncelikle, hassas bakterileri ortadan kaldıran artan bir antibiyotik konsantrasyonuyla önceden işlenmiş bakteriyel örneklerle başlayın.
Aynı antibiyotik konsantrasyonu içeren bir büyüme ortamı ile ilgili tüplere ekleyin.
Tüpleri sallanma koşullarında kuluçka yapın.
Döteryum oksit bakteri hücrelerine girer ve burada döteryum, yeni sentezlenen biyomoleküllere dahil edilerek karbon–döteryum bağları oluşturur.
Bakterileri döndürün, süpernatantı atın ve yıkayın.
Bakteriyel yapıyı korumak için bir fiksant ekleyin.
Su ekleyin, santrifüj yapın ve üst maddeyi çıkarın.
Bakteriyi yeniden askıya alın ve süspansiyonu poli-L-lizin kaplı bir örtü camına aktarın, ardından kapatın.
Örneği önceden kalibre edilmiş uyarılmış Raman saçılma veya SRS mikroskobunun aşamasına yerleştirin. Su ekleyin ve hedefi düşürün.
Karbon–döteryum titreşim frekansını değerlendirmek için birden fazla alanın görüntülerini alın.
Daha yüksek antibiyotik konsantrasyonlarında karbon–döteryum sinyali azalır ve bu da bakteriyellerin canlılığının azaldığını gösterir.
Bu, SRS sinyal yoğunluğunu bakteriyel canlılıkla ilişkilendirerek antibiyotik hassasiyetinin hızlı değerlendirilmesini sağlar.
1 saatlik kuluçkadan sonra, aynı antibiyotik konsantrasyonunda önceden aranmış 300 mikrolitre antibiyotik predentasyonu olan bakteriye %100 döteryum içeren MHB ortamıyla seri olarak seyreltilmiş 700 mikrolitre antibiyotik ekleyin. Karışımı birkaç kez yukarı ve aşağı pipetle homojenleştirin. Pozitif kontrol için 700 mikrolitre, antibiyotiksiz, %100 deuteryum içeren MHB ortamı ile 300 mikrolitre antibiyotiksiz bakteri ekleyin.
Negatif kontrol olarak antibiyotiksiz %0 döteryum içeren %0 döteryum içeren 700 mikrolitre, 300 mikrolitre antibiyotiksiz bakteri ekleyin. Tüm mikrotüpleri 37 derece Celsius ve dakikada 200 dönüşte 30 dakika boyunca kuluçka edin. İnkubasyondan sonra, 1 mililitre antibiyotik ve döteriyumla işlenmiş bakteri örneğini 6.200 kat g ile 5 dakika boyunca 4 derece Celsius sıcaklıkta santrifüj edin. Sonra peleti iki kez arıtılmış suyla yıkayın. Örnekleri %10 hacim hacim formalin çözeltisine sabitleyin ve 4 derece Celsius'ta saklayın.
Numune hazırlığı için, sabit bakteri çözeltisini 1 mililitre arıtılmış suyla yıkayın ve yıkanmış bakteri çözeltisini 6.200 kez g ile 5 dakika boyunca 4 derece Celsius sıcaklığında santrifüj yapın.
Üst maddeyi çıkarın ve bakteriyel çözeltiyi sterilize edilmiş suyla yaklaşık 20 mikrolitre kadar zenginleştirin. Bakteriyel çözeltiyi poli-L-lizin kaplı bir kapak camına bırakın, başka bir kapak camıyla sandviç yapın ve örneği mühürleyin. Bakteri örneği örnek aşamasına 60x suya battırma hedefi altında alın. Bakteri örneklerinin SRS görüntülemesine başlayın. Her örnek için en az üç görüş alanı görüntüleyin.